豬橫紋肌高表達新基因的克隆、定位、表達譜分析及SNPs與經(jīng)濟性狀和肌纖維性狀的關系研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高,人們對豬肉品質的要求也越來越高,如何提高肉質是當前畜牧業(yè)發(fā)展的主要任務之一。而以往的研究大都集中在肉質的表觀指標的分析以及屠宰后肉品的加工上,而對影響肉質好壞的分子機理研究較少。因此,研究影響肉質的分子機理是非常重要的,特別是研究肌纖維的形成及其組成的分子機理,不僅可以幫助人們了解動物肌肉生長發(fā)育的一般模式,而且可以從動物生長發(fā)育過程中,從肌肉的形成開始,通過適當?shù)耐緩秸{控肌肉生長來改善肉質。
　　 本研

2、究利用生物信息學與分子生物學技術相結合的方法,在豬中克隆和定位了四個在橫紋肌中高表達的基因,并作了一些初步的功能研究與預測,取得了如下結果:
　　 1.結合豬EST數(shù)據(jù)庫的信息和cDNA末端快速擴增(RACE)的方法,鑒定了豬ANKRD2基因的全長cDNA序列,并得到了ANKRD23和ASB15兩個基因的部分cDNA序列。同時利用生物信息學方法對ANKRD2,ANKRD23,ASB15三個基因的CDS全長序列進行了分析,推導其氨

3、基酸序列和可能的功能域,為進一步研究基因的功能奠定了基礎。
　　 2.利用體細胞雜種板(SCHP)和輻射雜種板(IMpRH)對ANKRD1,ANKRD2,ANKRD23和ASB15四個基因進行了染色體區(qū)域定位。將PCR分型數(shù)據(jù)提交到在線數(shù)據(jù)分析軟件進行統(tǒng)計分析,結果表明ANKRD1被定位在SSC14,與SW1552緊密連鎖(LOD=5.26)；ANKRD2也被定位在SSC14,與SW328緊密連鎖(LOD=10.44)；ANKR

4、D23定位在SSC3q12,與IGKC緊密連鎖(LOD=6.03)；ASB15定位在SSC18q13-21,與SW1984緊密連鎖(LOD=6.84)。以上四個基因所在的區(qū)域都存在與生長、肉質或肌纖維性狀相關的QTL。
　　 3.用半定量RT-PCR的方法,對ANKRD1基因進行了組織表達譜研究,對ANKRD2,ANKRD23和ASB15三個基因進行了組織表達譜和時期表達譜分析。結果表明除ANKRD23外其他三個基因都只在心肌和

5、骨骼肌中特異表達,而ANKRD23還要在褐色脂肪中表達,表明這四個基因在心肌和骨骼肌中都有重要的生理功能；ANKRD2,ANKRD23和ASB15三個基因在肌肉生長發(fā)育的不同時期存在差異表達,都是隨著時間的推移表達量增加,可能參與了肌肉的生長發(fā)育過程。
　　 4.運用Real-time Q-PCR技術,在通城和長白兩個豬種中對ANKRD2進行了骨骼肌發(fā)育不同階段的表達模式的分析。結果表明在33天左右ANKRD2表達量很低,在隨后

6、65天至90天左右表達量逐漸升高。從不同豬種的表達情況來看,從65天至90天的這段發(fā)育時期,該基因在長白豬中表達量顯著增加(P<0.05),而在通城豬中表達量的增加相對比較平穩(wěn),表明該基因在通城和長白豬中表達量存在差異。
　　 5.對ANKRD2基因進行了SNPs的檢測,結果發(fā)現(xiàn)了ANKRD2基因第五外顯子和第八外顯子具有ANKRD2-HaeⅢ(C-T)和ANKRD2-Mbol(C-T)兩個酶切位點。利用PCR-RFLP方法檢測

7、了這兩個SNPs在杜洛克、二花臉豬、清平豬、玉山黑豬、梅山豬、大花白豬和藏豬中的基因型分布。同時進行了群體遺傳學分析,卡方檢驗結果表明,這兩個SNPs位點的基因型頻率在不同的品種中存在較大的差異。
　　 6.在我室與通城縣畜牧局合作組建的試驗豬群中,采用方差分析的最小二乘分析法,利用廣義線性模型對上述兩個SNP位點與部分經(jīng)濟性狀進行了初步的關聯(lián)分析。結果發(fā)現(xiàn),ANKRD2基因第五外顯子的HaeⅢ多態(tài)性與肌內脂肪含量有極顯著的關聯(lián)