八肽膽囊收縮素對體外培養(yǎng)大鼠大腦皮層神經元的保護作用研究.pdf

1、目的：在新生大鼠大腦皮層神經元培養(yǎng)的基礎上，建立谷氨酸誘導的體外大腦皮層神經元損傷模型，研究八肽膽囊收縮素（CCK-8）對大腦皮層神經元的保護作用，探討其保護作用是否與調節(jié)Bcl-2、Bax和Caspase-3三種蛋白的表達有關。 方法：在無菌條件下，將新生24h內的SpragueDawley大鼠斷頭取腦，剔除腦膜及血管，分離皮層組織，原代培養(yǎng)8d，進行神經元鑒定后隨機分為3組：對照組、Glu組、CCK組。對照組不予任何處理；G

2、lu組用50μmol/L谷氨酸處理30min后，換用正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；CCK組在谷氨酸處理前先用CCK-8（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）處理24h；各組細胞在谷氨酸損傷后用原培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后獲取標本待檢。用噻唑藍（MTT）染色法檢測神經元活力；用吖啶橙/溴乙啶及DAPI染色，在熒光顯微鏡下觀察神經元的形態(tài)學變化；采用免疫組織化學技術檢測Bcl-2、Bax和Caspase-3三種蛋白的表達。

3、結果： （1）在倒置相差顯微鏡下觀察，原代培養(yǎng)8d的大鼠大腦皮層神經元胞體飽滿，立體感強，突起較長，互相連接，形成致密的網絡。 （2）經谷氨酸損傷后神經元活力較對照組明顯降低（P<0.05）；3個不同濃度的CCK組神經元活力均較Glu組高（P<0.05），且CCK-8濃度越高，神經元活力越高。 （3）吖啶橙/溴乙啶及DAPI染色可見Glu組有凋亡細胞的特征性形態(tài)學變化，表現為胞膜皺縮，突起回縮或斷裂，胞核固縮，并

4、可見到凋亡小體；CCK組細胞的形態(tài)與未損傷細胞相似，與Glu組相比，凋亡細胞數明顯減少，細胞損傷減輕。 （4）與對照組相比，Glu組Bcl-2蛋白表達下調、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表達上調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與Glu組相比，CCK組則上調Bcl-2蛋白、下調Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表達，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結論： （1）在培養(yǎng)新生大鼠大腦皮層神經元的基礎上，成