肝細胞生長因子作用于大鼠皮瓣的實驗研究.pdf

1、目的：皮瓣遠端壞死是整形重建外科經常遇到的問題。研究證實，一些生長因子如VEGF及bFGF可通過血管生成等機制提高皮瓣的存活率?；A研究證明，肝細胞生長因子(Hapatocyte Growth Factor，HGF)具有更強大的促進血管生成作用，但相關文獻報道對皮瓣存活的促進作用尚不明確。為發(fā)掘HGF在促進隨意皮瓣遠端存活方面的作用，本研究擬建立超長皮瓣動物模型觀察HGF對促進超長皮瓣存活的影響，并通過實驗病理技術觀察用藥與否的試驗動物

2、皮瓣的組織變化及血管生成情況。 方法：以20只4月齡、雄性、300-350g體重的Wistar大鼠為實驗動物，分別建立大鼠背部8cmx2cm(長寬比為4:1)隨意皮瓣動物模型。實驗動物隨機分為二組，每組10只，分別為HGF組、生理鹽水組(對照組)。HGF(購自英國Pepro Tech公司)以無菌生理鹽水配成濃度為100ng/ml的工作溶液。試驗組大鼠皮瓣掀起后即刻用4-0絲線原位縫合，用微量注射器抽取HGF工作溶液1ml，選擇距

3、皮瓣邊緣0.5cm處均勻分布的10點垂直注入受區(qū)表面，每點注射0.1ml。同法用微量注射器取用生理鹽水1ml注射對照組大鼠皮瓣。兩組術后6小時、12小時經背部重復給藥。術后每天觀察皮瓣顏色、質地、溫度、毛細血管回流等。術后7天，將大鼠處死，以透明紙繪出皮瓣模型，將壞死區(qū)與成活區(qū)界限標出，剪成兩部分。用電子稱稱量，以稱紙得出的重量代表面積的方法計算，按(成活部分/設計部分)×100％計算出成活面積比。實驗組和對照組大鼠術后7天取距蒂部4c

4、m處皮瓣中段2mm橫斷組織，10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察其組織學變化。由于血管壁有抗原CD34，為此我們使用免疫組織化學分析方法檢測CD34的陽性表達，標記皮瓣皮下平均血管數目。應用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析：組與組之間的比較采用t檢驗。P＜0.05為有統(tǒng)計學意義，P＜0.01為有顯著性差異。 結果：本實驗結果顯示：術后1天，兩組皮瓣彈性較好，皮瓣下無明顯積血積液，皮溫、色澤正常，兩組差別不顯。術后

5、4天，各組皮瓣遠端出現(xiàn)不同程度色澤變暗，輕度水腫。術后7天，各組皮瓣壞死與成活區(qū)分界明顯。術后7天，HGF組皮瓣成活率為75.13+3.02％，明顯高于生理鹽水組(62.01±2.51％)，有非常顯著性差異(P＜0.01)。實驗組與對照組相比表皮萎縮、皮下組織水腫均減輕，血管擴張、炎性細胞浸潤均減少。光鏡下病理可見：實驗組表皮萎縮不明顯，皮下組織無明顯水腫，血管輕度擴張，無明顯炎性細胞浸潤；而對照組表皮萎縮明顯，表皮變薄，皮下組織水腫和

6、血管擴張明顯，有明顯炎性細胞浸潤和皮下纖維組織增生。對照組皮瓣存活區(qū)新生血管和肉芽組織增生明顯少于實驗組。免疫組化檢測CD34標記的皮瓣微血管數目，400倍光鏡下觀察切片，隨機選取5個視野進行血管斷而計數，實驗組為(136.25±22.35)個，對照組為(89.55±14.44)個，實驗組微血管數目明顯多于對照組，兩組之間有顯著差異(P＜0.05)。 這一結果提示HGF有改善皮瓣遠端血供，促進隨意皮瓣存活的作用。HGF具有促進血

7、管內皮細胞增生、遷移和新生血管形成的作用，可用于治療各種原因所致組織缺血性疾??；能調節(jié)膠原纖維的合成和炎性反應，促進組織細胞的發(fā)生、生存和再生，在治療創(chuàng)傷愈合、防治組織纖維化中起著重要作用。我們推測，HGF對超長比例隨意皮瓣的存活改善作用主要通過以上機制尤其是促進皮瓣遠端血管生成作用實現(xiàn)。 結論：肝細胞生長因子是較強的血管生成因子，刺激血管內皮細胞增殖，管腔形成，促進血管新生，較早建立有效血液循環(huán)。隨意皮瓣下局部注射肝細胞生長因