辣椒素和RTX對(duì)DRG神經(jīng)元P物質(zhì)釋放及TRPV1表達(dá)的影響作用.pdf

1、辣椒素(capsaicin，CAP)是紅辣椒中的主要成分，它可以選擇性的激活感覺(jué)神經(jīng)元，向中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳導(dǎo)傷害性刺激從而產(chǎn)生灼痛。樹(shù)膠脂毒素（resiniferatoxin，RTX）屬于辣椒素的高效能類(lèi)似物，與辣椒素在結(jié)構(gòu)上有顯著的不同，卻有相似的生物學(xué)活性。CAP和RTX都可以與辣椒素受體(transientreceptor potential vanilloid type1，TRPVl)結(jié)合，在治療神經(jīng)源性炎癥等方面可發(fā)揮重要的作用

2、。
　　 TRPV1是存在于細(xì)胞膜上的一種非選擇性的配體門(mén)控性陽(yáng)離子通道，是感受傷害性刺激的分子感受器，在傷害性刺激信息轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。TRPVI對(duì)于炎性熱痛覺(jué)過(guò)敏的形成是至關(guān)重要的，被認(rèn)為是疼痛調(diào)節(jié)的關(guān)鍵物質(zhì)。
　　 背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion，DRG）是感受傷害性刺激的初級(jí)傳入神經(jīng)元胞體所在的部位。其中對(duì)CAP敏感的感覺(jué)神經(jīng)元可表達(dá)TRPV1，這類(lèi)神經(jīng)元大多數(shù)的是中、小直徑的神經(jīng)元，

3、其神經(jīng)纖維為無(wú)髓的C類(lèi)纖維或薄髓的Aδ纖維，主要傳導(dǎo)痛覺(jué)的刺激。CAP通過(guò)與該類(lèi)神經(jīng)元上的TRPVl結(jié)合，激活與受體直接偶聯(lián)的膜離子通道，可引發(fā)神經(jīng)肽的釋放。
　　 P物質(zhì)（substance P，SP）是一種由感覺(jué)神經(jīng)纖維末梢分泌的，分布于感覺(jué)神經(jīng)支配的外周組織的神經(jīng)肽。SP的釋放基于適度的刺激，它在傷害性感覺(jué)以及神經(jīng)源性炎癥發(fā)生機(jī)制中起著重要作用。大部分TRPV1免疫反應(yīng)陽(yáng)性的DRG神經(jīng)元表達(dá)SP，SP的釋放與TRPV1的激

4、活密切相關(guān)。
　　 CAP和RTX對(duì)間質(zhì)性膀胱炎等神經(jīng)源性疾病的潛在的治療作用越來(lái)越受到重視，但二者在對(duì)TRPV1的親和力、感覺(jué)神經(jīng)肽的耗竭以及初級(jí)傳入神經(jīng)元神經(jīng)毒性等方面存在差異，有待于進(jìn)一步闡明。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在探討，不同濃度CAP和RTX對(duì)培養(yǎng)的DRG神經(jīng)元SP的釋放及TRPV1表達(dá)影響的異同。
　　 本實(shí)驗(yàn)將原代培養(yǎng)的15d胎鼠DRG神經(jīng)元，在體外分散培養(yǎng)72h后，分別用CAP（1μmol/L，10μm

5、ol/L）和RTX（10 nmol/L，100 nmol/L）進(jìn)行處理10 min，然后用放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)檢測(cè)感覺(jué)神經(jīng)肽SP的釋放，并更換培養(yǎng)液再培養(yǎng)6d。再用RIA測(cè)定SP的釋放，用RT-PCR方法檢測(cè)編碼SP的前速激肽原(preprotachykinin，PPT)mRNA和TRPVl mRNA的表達(dá)，用Western blot方法檢測(cè)SP和TRPV1蛋白的表達(dá)。
　　 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下

6、：
　　 (1)CAP或RTX急性刺激對(duì)SP釋放的影響
　　 用RIA法檢測(cè)CAP或RTX引發(fā)的DRG神經(jīng)元SP的釋放，結(jié)果顯示：分散培養(yǎng)72 h的DRG神經(jīng)元受CAP或RTX刺激10 min后，SP釋放較對(duì)照組顯著增加。刺激后6d，SP釋放較對(duì)照組減少。
　　 (2)CAP或RTX對(duì)PPTmRNA和TRPVl mRNA的影響
　　 分散培養(yǎng)3d的DRG神經(jīng)元受CAP或RTX刺激10 min后，更換新培養(yǎng)

7、液繼續(xù)培養(yǎng)6d，用RT-PCR檢測(cè)PPTmRNA和TRPVl mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：CAP或高濃度RTX使PPTmRNA和TRPV-lmRNA水平下降，而低濃度的RTX則對(duì)其沒(méi)有影響。
　　 (3)CAP或RTX對(duì)SP和TRPV1蛋白表達(dá)的影響
　　 分散培養(yǎng)3d的DRG神經(jīng)元受CAP或RTX刺激10 min后，更換新培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)6d，用Western blot檢測(cè)SP和TRPVI蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示：DRG神