急性出血壞死性胰腺炎肺損傷發(fā)病機制及中藥治療的實驗研究.pdf

1、論文一磷脂酶A<,2>對大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞的損傷作用研究.目的：急性出血壞死性胰腺炎(AHNP)時血中增多的磷脂酶A<,2>(PLA<,2>)對Ⅱ型肺泡上皮細胞的損傷作用是引起胰腺炎肺損傷的重要因素.該研究對大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞進行分離純化和原代培養(yǎng),并在體外研究了PLA<,2>及含有PLA<,2>的AHNP大鼠血清對培養(yǎng)細胞的損傷作用及機理.方法對大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞進行分離純化和原代培養(yǎng),分別加入PLA<,2>及含有PLA<,2>

2、的AHNP大鼠血清,并設PLA<,2>抑制劑(鹽酸阿的平)對照組,各組均孵育4h,離心收集細胞,破碎細胞核提取核蛋白,ELISA法測定NF-κ B活性;測定培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活性,另外對培養(yǎng)細胞進行透射電鏡檢查,觀察PLA<,2>對肺泡Ⅱ型上皮細胞的損傷作用.結論：AHNP時,PLA<,2>對Ⅱ型肺泡上皮細胞的損傷作用是造成胰腺炎肺損傷的重要因素;這種損傷作用除了與其對Ⅱ型肺泡上皮細胞的直接損傷作用有關外,還與其激活NF-

3、κ B的表達有關.論文二：磷脂酶A<,2>與NF-κB活化在大鼠急性壞死性胰腺炎肺損傷中的作用.目的：探討磷脂酶A<,2>與NF-κ B活化在大鼠急性壞死性胰腺炎肺損傷中的作用.方法：健康Wistar大鼠108只,體重250-290g,隨機分為3組:假手術組(36只)、模型組(36只)、PLA<,2>抑制劑組(36只).假手術組只開腹翻動腹腔臟器數(shù)次即關腹;模型組經(jīng)膽胰管逆行注射5％?；悄懰徕c(1ml/kg,0.1ml/min)誘發(fā)急性

4、出血壞死性胰腺炎,PLA<,2>抑制劑組在造模后30min經(jīng)尾靜脈注射quinacrine(5mg/kg),造模方法與模型組相同.3組動物分別隨機分為3h、6h、12h三組(每組8只),其余12只用于觀察24小時死亡率.于3個時間點,麻醉狀態(tài)下經(jīng)腹主動脈取血,測定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6;抽取腹水,測定淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>;取左肺一部分勻漿,測定MPO、PLA<,2>、TNF α、

5、IL-l、IL-6,一部分提取核蛋白,蛋白印跡法檢測NF-κ B表達,一部分經(jīng)10％甲醛同定作病理組織學檢查,取右肺進行肺泡灌洗,分離收集并純化肺泡巨噬細胞,提取核蛋白后采用化學發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P<'65>)的表達情況;留取胰腺組織進行組織病理學觀察.結論：PLA<,2>在急性壞死性胰腺炎肺損傷中起重要作用;PLA<,2>可以通過激活肺組織及肺泡巨噬細胞NF-κ B,上調多種細胞因子的表達而產(chǎn)生肺損害作用;阻斷磷脂酶A

6、<,2>可以有效地減輕胰腺炎肺損傷.論文三清胰湯對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷的治療機理研究.目的：研究清胰湯對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷的治療機理.方法：健康wistar大鼠180只,隨機分為5組:假手術組(36只)、模型組(36只)、清胰湯組(36只)、善寧組(36只)、NF-κ B抑制劑組(36只).假手術組只開腹翻動腹腔臟器數(shù)次即關腹;模型組經(jīng)膽胰管逆行注射5％牛磺膽酸鈉(1ml/kg,0.1ml/min)誘發(fā)急性出血壞死性胰腺炎

7、;清胰湯組在造模后30min灌胃清胰湯(10ml/kg);善寧組在造模后30min皮下注射善寧(50 μ g/kg);NF-κ B抑制劑組在造模后30min經(jīng)尾靜脈注射PDTC(120mg/kg).5組動物分別隨機分為3h、6h、12h三組(每組8只),其余12只用于觀察24小時死亡率.于3個時間點,麻醉狀態(tài)下經(jīng)腹主動脈取血,測定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6;抽取腹水,測定淀粉酶、脂肪酶、PLA

8、<,2>;取左肺一部分勻漿,測定MP0、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6,一部分提取核蛋白,化學發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B表達,一部分經(jīng)10％甲醛固定作病理組織學檢查,取右肺進行肺泡灌沈,分離收集并純化肺泡巨噬細胞,提取核蛋白后采用化學發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P65)的表達情況;留取胰腺組織進行組織病理學觀察.結論：清胰湯可通過其多途徑多靶點作用,抑制PLA<,2>活性,抑制肺組織及肺內(nèi)炎癥相關細胞的N

9、F-κ B活化,下調多種細胞因子表達,減輕肺及其它器官的損害,降低死亡率.論文四粉防己堿對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷治療機理研究.目的：觀察粉防己堿對實驗性急性出血壞死性胰腺炎肺損傷大鼠的治療作用,并對其作用機理進行探討.方法：取Wistar大鼠108只,隨機分為假手術組、模型組、粉防己堿組.經(jīng)膽胰管逆行注射?；悄懰徕c復制急性出血壞死性胰腺炎模型,在造模后30min經(jīng)尾靜脈注射粉防己堿(120mg/kg),術后3h、6h、12h取血,測

10、定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF α、IL-1、IL-6;記錄腹水量,測定腹水淀粉酶、脂肪酶、PLA2;取左肺一部分勻漿,測定MPO、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6,一部分經(jīng)10％甲醛固定作病理組織學檢查,取右肺進行肺泡灌洗,分離收集并純化肺泡巨噬細胞,提取核蛋白后采用化學發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P65)活性;留取胰腺組織進行組織病理學檢查;觀察各組24小時死亡率.結論：粉防己堿可顯著抑制PLA

11、<,2>的激活,進而抑制NF-κ B的活化,下調多種細胞因子的表達,抑制"細胞因子風暴"的產(chǎn)生,減輕對肺組織的損害作用.論文五川芎嗪對急性出血壞死性胰腺炎肺損傷治療機理研究.目的：觀察川芎嗪對實驗性急性出血壞死性胰腺炎肺損傷大鼠的治療作用,并對其作用機理進行探討.方法：取Wistar大鼠108只,隨機分為假手術組、模型組、川芎嗪組3組.經(jīng)膽胰管逆行注射5％?；悄懰徕c(1ml/kg體重,0.1ml/min)復制急性出血壞死性胰腺炎模型,在

12、造模后30min經(jīng)尾靜脈注射川芎嗪(80mg/kg),術后3h、6h、12h取血,測定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6;記錄腹水量,測定腹水淀粉酶、脂肪酶、PLA<,2>;取左肺一部分勻漿,測定MPO、PLA<,2>、TNF<,α>、IL-1、IL-6,一部分經(jīng)10％甲醛固定作病理組織學檢查,取右肺進行肺泡灌洗,分離收集并純化肺泡巨噬細胞,提取核蛋白后采用化學發(fā)光ELISA法檢測NF-κ B(P65