丹參酮ⅡA誘導(dǎo)人卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制.pdf

1、目的： 研究丹參酮ⅡA(TanⅡA)誘導(dǎo)人卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用，探討其作用機(jī)制，為T(mén)anⅡA應(yīng)用于臨床治療卵巢癌提供理論依據(jù)。 方法： MTT法檢測(cè)人卵巢癌A2780細(xì)胞經(jīng)TanⅡA藥物處理后細(xì)胞的增殖情況，計(jì)算細(xì)胞抑制率=(1—實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對(duì)照組吸光度值)×100％。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三遍，取三次結(jié)果的平均值。然后以藥物濃度為橫坐標(biāo)，以細(xì)胞抑制率為縱坐標(biāo)，用Excel軟件繪制出細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線，并用IC50

2、計(jì)算軟件計(jì)算出藥物作用細(xì)胞的半數(shù)抑制率(IC50)。 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組(對(duì)照組)和實(shí)驗(yàn)組。其中實(shí)驗(yàn)組依據(jù)4.0 mg/L TanⅡ A作用于卵巢癌A2780細(xì)胞時(shí)間的長(zhǎng)短不同，又分為24h組、48h組、72h組三個(gè)組。每個(gè)組均設(shè)3個(gè)平行樣本。細(xì)胞以1×105的濃度接種到25cm2的培養(yǎng)瓶中。收集對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞，進(jìn)行固定、染色，通過(guò)FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡，定量測(cè)定細(xì)胞凋亡率。 Wes

3、tern blotting法(按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作)分別檢測(cè)對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞中Bc1-2及Bax兩種蛋白表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 1．TanⅡ A對(duì)人卵巢癌A2780細(xì)胞的增殖具有抑制作用，其作用強(qiáng)度隨著藥物作用時(shí)間及濃度的增加而增強(qiáng)，呈時(shí)間—?jiǎng)┝恳蕾?lài)性。TanⅡA作用A2780細(xì)胞48h的半數(shù)抑制率為7.78mg/L。 2．流式細(xì)胞儀顯示，經(jīng)4.0 mg/L TanⅡA處理后，凋亡的卵巢癌A2780細(xì)胞明顯增多

4、。FCM定量顯示0，24，48，72h的凋亡率分別為4.52％，19.7％，25.3％，40.40％。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，凋亡細(xì)胞增多，72h的凋亡率達(dá)到最高值，與對(duì)照組比較，24、48、72h藥物作用組凋亡率增高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3．Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞Bax及Bc1-2兩種蛋白表達(dá)情況，結(jié)果表明與空白組相比，實(shí)驗(yàn)組中Bax的表達(dá)均有所增加，而B(niǎo)c1-2的表達(dá)則有所減少(P＜0.05)，Bc1-2/B