磷脂酶A-,2-在SD大鼠NAFLD肝細胞脂性凋亡中的作用機制研究.pdf

1、研究背景
　　 非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明確的肝損因素所致的以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合癥,包括非酒精性單純性脂肪肝以及由其演變的非酒精性脂肪肝炎和肝硬變,肝細胞脂性凋亡是NAFLD最具特征的病理表現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)體內游離脂肪酸(FFA)的代謝失衡是導致脂肪肝的最主要原因,特別是FFA介導的肝細胞的過度脂性凋亡是NAFLD發(fā)生發(fā)展的關鍵,但其確切發(fā)病機制尚不明了。近年來研究表明:NAFL

2、D患者肝臟內大部分的FFAs是進入非氧化代謝途徑而非傳統(tǒng)的β氧化途徑,非氧化代謝產(chǎn)生的活性脂肪酸衍生分子可能是導致肝細胞脂性凋亡的關鍵因素。FFAs向磷脂酸/二?；视?DAG)途徑進行代謝更容易導致肝細胞脂性凋亡,升高的DAG在膽堿磷酸轉移酶等催化作用下迅速合成磷脂酰膽堿(PC),進一步激活磷脂酶,溶解細胞膜中的磷脂酰膽堿而釋放出溶血磷脂酰膽堿(LPC),而LPC是氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)的重要脂質成分,是引起多種細胞凋亡的關

3、鍵分子。所有磷脂酶中只有磷脂酶A2(PLA2)專一水解甘油磷脂2-酰酯鍵,產(chǎn)生溶血磷脂和游離脂肪酸。那么PLA2/LPC代謝途徑在肝細胞脂性凋亡中是否起重要作用,PLA2或其某一亞型的異?；罨遣皇瞧潢P鍵性的分子事件,目前不清楚。
　　 本研究通過建立高脂飲食誘導的SD大鼠NAFLD模型,模擬人體內的發(fā)病過程,通過分析在體肝細胞的基本病理變化(脂質聚集、凋亡程度、電鏡形態(tài))與PLA2及其亞型(sPLA2、cPLA2、iPLA2)

4、表達水平、酶活性等變化的關系;進一步通過分析PLA2抑制劑(藥物阻斷技術)對肝細胞脂性凋亡的影響,以揭示:PLA2在FFA致肝細胞脂性凋亡過程中的作用。因此,本項目將初步闡明FFA致肝細胞過度脂性凋亡的具體分子機制,為臨床NAFLD的防治提供新的靶點和思路。
　　 目的
　　 分析NAFLD大鼠模型肝細胞的基本病理變化與PLA2及其亞型的關系及PLA2抑制劑(藥物阻斷技術)對肝細胞脂性凋亡的影響,以揭示PLA2在FFA致

5、肝細胞脂性凋亡過程中的作用。
　　 方法：
　　 把52只雄性SD大鼠,質量150～170g,鼠齡4～6 wk。隨機分成6組:普通飲食喂養(yǎng)組(Ⅰ組)12只喂養(yǎng)18周,空白高脂飲食喂養(yǎng)組(Ⅱ組)8只、鈣依賴性和非鈣依賴性PLA2總體抑制劑(MAFP)干預組(Ⅲ組)8只、胞漿型PLA2抑制劑(ACCOCF3)干預組(Ⅳ組)8只、鈣非依賴性PLA2抑制劑(BEL)干預組(Ⅴ組)8只、分泌型PLA2抑制劑干預組(Ⅵ組)8只,Ⅱ～

6、Ⅵ組高脂喂養(yǎng)14周后分別予以二甲基亞砜(DMSO)、MAFP、ACCOCF3、BEL、sPLA2抑制劑腹腔注射,隔天1次,共14次。喂養(yǎng)結束同時處死。測定大鼠血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、脂蛋白a(Lpa)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、游離脂肪酸(FFA)、胞漿型磷脂酶A2(c PLA2)、分泌型磷脂酶A2(s

7、PLA2)、鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)、瘦素(Leptin)等指標,檢測肝各類PLA2mRNA的表達,在光鏡下觀察大鼠肝臟形態(tài)學改變,在透射電鏡下觀察肝細胞、線粒體及其他細胞外基質的超微結構變化。
　　 結果：
　　 與普通飲食喂養(yǎng)組比較高脂飲食組病理結果存在明顯的脂肪變性及凋亡,電鏡下可見線粒體腫脹脊紊亂,內質網(wǎng)脫顆粒,血cPLA2及iPLA2濃度明顯增高,同時肝cPLA2、iPLA2 mRNA表達明顯增高;各

8、干預組之間比較iPLA2及cPLA2抑制劑處理組肝細胞的凋亡較其他各組有所減少,線粒體的損傷也較輕。而且在FINS、HOMA-IR、IAI、瘦素、血cPLA2、血iPLA2有統(tǒng)計學差異(p≤0.05)。同時兩兩比較發(fā)現(xiàn)cPLA2抑制劑干預組的血清瘦素濃度明顯低于各組,有統(tǒng)計學意義(p≤0.05);iPLA2抑制劑干預組的FINS、HOMA-IR較其他各組下降,IAI較其他各組上升,有統(tǒng)計學意義(p≤0.05)。
　　 結論：