抗蟲棉田殘留Bt殺蟲蛋白檢測及對土壤微生物的影響.pdf

1、檢測抗蟲棉田土壤中殘留的Bt殺蟲蛋白的降解動態(tài)，明確其對土壤微生物的影響是轉基因棉花環(huán)境安全研究的重要內容。本文綜合運用生物化學、生態(tài)學、土壤微生物學等學科的理論與方法，以轉Bt基因棉、轉雙價基因(Bt+CpTI)棉和常規(guī)棉品種為試驗材料，對抗蟲棉棉葉中Bt殺蟲蛋白在土壤中的降解動態(tài)、根系中分泌Bt殺蟲蛋白的規(guī)律、土壤中殘留的Bt殺蟲蛋白的檢測技術及降解規(guī)律、不同生育期土壤微生物的數(shù)量等開展了研究。本研究旨在為轉基因棉花安全性評價積累科

2、學數(shù)據，對于保護生態(tài)環(huán)境和人類健康，保障生物技術的健康發(fā)展具有重要的意義。主要研究結果如下： 1、采用ELISA方法檢測了轉Bt基因棉(GK12)和轉雙價基因(Bt+CpTI)棉(中棉所41)葉片中Bt殺蟲蛋白在土壤掩埋條件下的降解動態(tài)。明確了轉Bt基因棉和轉雙價基因棉葉片中Bt殺蟲蛋白的降解動態(tài)基本一致，降解周期達六個月；葉片掩埋后第1～3個月，殺蟲蛋白降解最為迅速，第4～6個月降解緩慢，第7個月棉葉中已檢測不到Bt殺蟲蛋白。

3、 2、測定了轉Bt基因棉(GK12)和轉雙價基因(Bt+CpTI)棉(中棉所41)不同生育期根系中Bt殺蟲蛋白含量的變化動態(tài)。明確了轉Bt基因棉和轉雙價基因棉根系中Bt殺蟲蛋白的含量變化趨勢基本一致，5月份殺蟲蛋白含量最高，分別為715.55ng/g和531.23ng/g，6月份開始迅速下降，9月份含量分別下降到45.63ng/g和42.33ng/g；10月份至次年3月份，棉株根系中Bt殺蟲蛋白含量逐漸下降，至次年4月份已檢測不

4、到Bt殺蟲蛋白。 3、建立了抗蟲棉田土壤顆粒中Bt殺蟲蛋白的檢測方法。確定了土壤中Bt殺蟲蛋白提取的最佳時間為20h，提取原液的濃度為0.125g·mL-1，提取原液的最佳稀釋倍數(shù)為2倍，明確了抗蟲棉田土壤的取樣部位是距離棉株主莖約0～10cm、距離地表深度約10～20cm的位置。 4、檢測了轉Bt基因棉(GK12)和轉雙價基因(Bt+CpTI)棉(中棉所41)田土壤中Bt殺蟲蛋白的降解動態(tài)。明確了轉Bt基因棉和轉Bt+

5、CpTI基因棉田土壤中Bt殺蟲蛋白的降解動態(tài)基本一致；兩類抗蟲棉播種前土壤中均檢測不到Bt殺蟲蛋白，苗期開始Bt殺蟲蛋白的含量逐漸增加，至花期均達到最高峰(324.06ng/g和355.50ng/g)，鈴期以后逐漸下降，至收獲期分別下降到50.25ng/g和65.76ng/g；棉花收獲后六個月內，兩類抗蟲棉田土壤中Bt殺蟲蛋白含量迅速降低，直到次年4月份已檢測不到Bt殺蟲蛋白。 5、明確了種植抗蟲棉不同年限土壤中Bt殺蟲蛋白含量

6、除9月和11月份差異達顯著水平外，其他月份的差異均不顯著。表明抗蟲棉種植年限總體而言對土壤中Bt殺蟲蛋白含量的變化無明顯的影響。不同種植年限的抗蟲棉棉田殺蟲蛋白含量的降解規(guī)律基本一致。 6、運用平板計數(shù)法測定了轉Bt基因棉(GK12、中棉所30、邯5158)、轉雙價基因(Bt+CpTI)棉(中棉所41、sGK321、中棉所1904)和常規(guī)棉(中23)土壤中微生物的種群數(shù)量，明確了兩類抗蟲棉田真菌和放線菌的數(shù)量在不同生育期均明顯高