胃癌細胞中TRAF1基因的干擾對其凋亡和遷移功能的影響.pdf

1、研究背景與目的:胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，目前國內外已有多項研究證實胃癌的發(fā)生與幽門螺桿菌(Helicobaeterpylori，H.pylori)有著密切的關系。本課題組通過前期研究發(fā)現(xiàn)正常胃粘膜上皮細胞株GES-1與胃癌組織來源的H.pylori共培養(yǎng)后可發(fā)生TRAF1基因上調的現(xiàn)象，并且在胃癌前病變及胃癌組織中有TRAF1表達增高的現(xiàn)象。而目前通過研究已經發(fā)現(xiàn)TRAF1與多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有相關關系。所以本課題擬建立TR

2、AF1基因干擾的瞬時轉染的胃癌細胞模型來明確TRAF1在胃癌，特別是H.pylori相關的胃癌的發(fā)生和發(fā)展究竟存在怎樣的相關性。
　　 方法:首先我們通過Real-time PCR和Western-blot兩種方法來驗證TRAF1在BGC823、SGC7901、MGC803三株胃癌細胞株的表達情況，并從中篩選TRAF1表達最高的一株細胞進行后期實驗。我們根據(jù)參考文獻構建3個TRAF1 shRNA表達載體pLVX-shRNA2-T

3、RAF1-shRNA1-3，然后用Lipofectamine2000脂質體將其分別轉染至目標胃癌細胞株中，再應用Real-time PCR和Western-blot來檢測轉染前后細胞中TRAF1基因在mRNA和蛋白水平的表達變化，以此來驗證干擾的效果，并且篩選出干擾效率最強的TRAF1 shRNA來進行后續(xù)的實驗。經檢測確定TRAF1被成功干擾后，我們可通過MTT法、流式細胞技術檢測TRAF1對胃癌細胞增殖活力和凋亡的影響，通過Tran

4、swell遷移實驗來檢測TRAF1對胃癌細胞遷移能力的影響。
　　 結果:
　　 1.在BGC823、SGC7901、MGC803三株胃癌細胞株中，TRAF1的表達較正常胃上皮細胞系GES-1均有上調，其中在BGC823細胞株中表達最高。
　　 2.根據(jù)參考文獻選取的3個TRAF1 shRNA對TRAF1基因均有干擾作用，其中以pLVX-shRNA2-TRAF1-shRNA2干擾效果最強。
　　 3.干擾

5、胃癌細胞BGC823中的TRAF1可使細胞生長活力減弱，凋亡明顯增加。
　　 4.干擾胃癌細胞BGC823中的TRAF1對細胞的遷移功能無顯著影響。
　　 結論:在BGC823，SGC7901，MGC803三株胃癌細胞株中，TRAF1基因的表達均有上調的現(xiàn)象，并且以BGC823上調最明顯。通過體外干擾胃癌細胞株BGC823，我們可以發(fā)現(xiàn)TRAF1可抑制BGC823細胞的凋亡。這些研究提示TRAF1在胃癌的發(fā)展過程中有可能