去甲基化劑對胰腺癌細胞BxPC-3中microRNAs表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
　　采用LNATM microRNA芯片技術，探討去甲基化劑5-氮雜脫氧胞苷酸對胰腺癌BxPc-3細胞中microRNAs表達的影響，并獲得DNA甲基化修飾的microRNA表達譜。
　　方法:
　　將胰腺癌BxPc-3細胞的培養(yǎng)及分實驗組和對照組，實驗組給予5-氮雜脫氧胞苷酸，處理72 hr，對照組給予同體積的PBS。再把裂解好的組織有機抽提，過濾分離RNA，然后用電泳檢查芯片RNA的完整性并用紫外分光光度測

2、定RNA濃度和純度。設定miRNA微陳列探針及熒光標記miRNA(cy3/cy5)，經過雜交和洗脫后，進行microRNA芯片檢測，采集掃描圖像和處理數據。然后再用Trizol法提取總RNA，并用1％瓊脂糖電泳驗證其完整性。最后根據芯片結果，選擇3個表達異常的miRNA進行RT-PCR，進一步驗證miRNA的異常表達結果的可靠性。
　　結果:
　　1、依芯片結果，以RATIO＞2倍為上調和RATIO＜0.5倍為下調的標準，獲

3、得miRNA差異表達譜。分析得出，共有63種miRNA上調和21種miRNA下調。其中上調明顯的有6種miRNA(miR-605、miR-720、miR-197-4、miR-34b、miR-148a和miR-205)，下調明顯的有3種miRNA(miR-569、miR-1207-5p和miR-1268)。
　　2、從表達明顯異常的9種miRNA中選擇3種（miR-34b、miR-148a和miR-205）進行RT-PCR驗證發(fā)現3

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