粳型超級(jí)稻稻瘟病抗性遺傳分析及基因定位研究.pdf

1、本文對(duì)沈農(nóng)606的抗稻瘟性進(jìn)行了遺傳研究，并對(duì)稻瘟病抗性基因進(jìn)行了分子標(biāo)記定位，結(jié)果如下： 1．選用抗稻瘟病品種沈農(nóng)606與感病品種麗江新團(tuán)黑谷配制組合，對(duì)F2群體(828株)接種稻瘟病菌ZA41生理小種，鑒定結(jié)果表明F2群體中抗病和感病的分離比為632：196，經(jīng)卡方檢驗(yàn)表明，粳型超級(jí)稻沈農(nóng)606對(duì)ZA41小種的抗病性表現(xiàn)為由一對(duì)核基因控制的顯性遺傳，并將該基因暫命名為Pi-SN606。 2．相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(seq

2、uence-related amplified polymorphism，SRAP)是一種新型的基于PCR技術(shù)的分子標(biāo)記，該標(biāo)記可對(duì)基因的編碼區(qū)域進(jìn)行特異性擴(kuò)增。因而在基因定位、基因克隆、遺傳圖譜構(gòu)建、比較基因組學(xué)等諸多研究領(lǐng)域有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，本研究在國(guó)內(nèi)首先建立了SRAP標(biāo)記在水稻上應(yīng)用的穩(wěn)定反應(yīng)體系，在15μ L體系中加入25ng左右的DNA模板； 200m mol·L<'-1>dNTP； 1 U Taq DNA聚合酶；0.3 μm

3、ol·L<'-1>的引物； 2.5m mol·L<'-1>的Mg<'2+>。 3．篩選出兩個(gè)與沈農(nóng)606中抗稻瘟病基因Pi-SN606相連鎖的SRAP引物。m5el-500和m2e5-600，遺傳距離分別為2.8和7.7cM。 4．利用84個(gè)SSR(simple sequence repeat，SSR)標(biāo)記對(duì)該抗稻瘟病基因的染色體位置進(jìn)行錨定，最終將該基因定位在8號(hào)染色體上，與SSR標(biāo)記RM25的遺傳距離為9.8cM。

4、 5．對(duì)與抗稻瘟病基因Pi-SN606連鎖的SRAP m5el-500片段進(jìn)行測(cè)序后，與NCBI和RGP的數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后發(fā)現(xiàn)序列位于8號(hào)染色體末端。這與SSR標(biāo)記的定位結(jié)果一致，證明可以利用SRAP片段的序列進(jìn)行染色體錨定。 綜上，通過本研究明確了沈農(nóng)606中的抗性是由一對(duì)核基因控制的顯性性狀，篩選到了與抗病基因連鎖的1個(gè)SSR標(biāo)記和2個(gè)SRAP，并將該基因初步定位到8號(hào)染色體，為下一步的基因克隆和輔助育種實(shí)用化奠定基礎(chǔ)；同