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文檔簡介
1、棉花黃萎病是一種危害嚴(yán)重的世界性病害，目前已遍布世界30多個國家和地區(qū)，已成為嚴(yán)重影響世界各主產(chǎn)棉國棉花高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要障礙。為了控制棉花黃萎病，減少其帶來的經(jīng)濟(jì)損失，建立對其方便快捷、切實有效的檢測方法，本實驗室利用棉花黃萎菌的菌絲蛋白作為抗原免疫家兔，制備了該病原菌的多克隆抗體，通過對3只不同家兔個體免疫產(chǎn)生的抗體進(jìn)行篩選，選擇出效價最高的抗體，測定其特異性，并以此抗體進(jìn)行了抗體、羊抗兔抗體在間接ELISA檢測實驗中最適反應(yīng)濃度的篩選
2、，并最終確定以抗體工作濃度1：2000，羊抗兔抗體工作濃度1：500建立特異性檢測棉花黃萎病菌的間接ELISA方法，該方法檢測靈敏度達(dá)到5ng/mL棉花黃萎菌菌絲蛋白。
本實驗所制備的多克隆抗體經(jīng)過Protein-A柱純化，特異性較好，效價可達(dá)1：64000。將此多克隆抗體進(jìn)行生物素標(biāo)記，并進(jìn)行了初步的雙抗夾心ELISA實驗。
應(yīng)用間接ELISA方法檢測棉花組織及其根部土壤中棉花黃萎菌的含量，發(fā)現(xiàn)病株的莖、根
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