間充質(zhì)干細(xì)胞TRAIL雙重靶向治療胰腺癌的在體實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立人胰腺癌 ASPC-1-dsRed熒光細(xì)胞裸鼠原位移植瘤模型及間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSC)-TRAIL轉(zhuǎn)基因復(fù)合物，并無創(chuàng)監(jiān)測和分析后者在體內(nèi)環(huán)境中對胰腺癌的歸巢能力與腫瘤抑制作用。本研究將為胰腺癌體內(nèi)生物學(xué)特性的基礎(chǔ)研究及新型治療方案的誕生提供更佳的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和平臺。
　　方法：（1）將紅色熒光蛋白(red fluorescent protein, RFP) dsRed基因轉(zhuǎn)入人胰

2、腺癌細(xì)胞株ASPC-1，并穩(wěn)定表達(dá)；（2）建立皮下移植瘤模型、基質(zhì)膠原位移植瘤模型和腫瘤塊原位移植瘤模型，并通過動物活體熒光成像系統(tǒng)無創(chuàng)監(jiān)測腫瘤生長情況，比較三組模型成瘤陽性率、瘤塊生長速率及轉(zhuǎn)移率，挑選最佳建模方法；（3）分離純化健康志愿者骨髓來源的MSC，并將TRAIL-增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入其中構(gòu)成MSC-TRAIL轉(zhuǎn)基因復(fù)合物，且驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染效

3、率；（4）通過腹腔和尾靜脈注射法給予荷瘤鼠MSC-eGFP轉(zhuǎn)基因復(fù)合物，并用動物活體成像系統(tǒng)檢測荷瘤鼠在體熒光以追蹤MSC在體內(nèi)的分布及對胰腺癌的趨化性；（5）將上述MSC-TRAIL轉(zhuǎn)基因復(fù)合物，以合適途徑給予荷瘤鼠，觀察其對原位瘤及轉(zhuǎn)移瘤的抑制作用；并綜合分析該復(fù)合物給予的數(shù)量及頻率與腫瘤大小的相關(guān)性。
　　結(jié)果：（1）熒光顯微鏡下可見人胰腺癌熒光細(xì)胞ASPC-1-dsRed發(fā)出均勻穩(wěn)定的紅色熒光，體內(nèi)外穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)未衰減；（

4、2）成功建立三組胰腺癌裸鼠移植瘤模型，成瘤陽性率分別為：皮下移植瘤模型55％(11/20)，基質(zhì)膠原位移植瘤模型100%(20/20)，腫瘤塊原位移植瘤模型100%(20/20)，且后兩種模型30天后陸續(xù)發(fā)生周圍臟器轉(zhuǎn)移；3組間成瘤速率比較后發(fā)現(xiàn)，皮下移植瘤模型最慢，基質(zhì)膠原位移植瘤模型居中，腫瘤塊原位移植瘤模型最快，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；（3）成功分離及培養(yǎng)人骨髓來源的MSC，并將質(zhì)粒TRAIL-eGFP轉(zhuǎn)入其中，鏡下可

5、見綠色熒光，Western Blot驗(yàn)證產(chǎn)物表達(dá)；（4）通過腹腔和尾靜脈注射法兩種途徑給予荷瘤鼠MSC-eGFP轉(zhuǎn)基因復(fù)合物，動物活體成像系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)15天內(nèi)尾靜脈注射途徑較腹腔注射途徑稍早觀察到MSC的歸巢現(xiàn)象，前者36 d移植瘤體積為510.88±55.96 mm3，后者為425.96±46.55 mm3,但兩者無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；（5）給藥24 d各組原位瘤平均體積：陰性對照組：419.19±21.96 mm3；MSC組：5

6、50.22±59.48 mm3；LL-MSC-TRAIL組：267.65±9.90 mm3；LH-MSC-TRAIL組：169.96±10.05 mm3；HL-MSC-TRAIL組：202.99±14.17 mm3；HH-MSC-TRAIL組：58.21±9.28 mm3；各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：人胰腺癌熒光細(xì)胞ASPC-1-dsRed構(gòu)建的裸鼠原位移植瘤模型能較好地模擬該腫瘤的在體生物學(xué)行為；MS