鞭毛蛋白的表達純化和對免疫細胞的影響.pdf

1、背景：
　　鞭毛蛋白（flagellin）是組成細菌運動器官鞭毛的基本蛋白結(jié)構(gòu)。由于細菌種屬的不同，鞭毛蛋白的結(jié)構(gòu)也不同，但是其都擁有相似的結(jié)構(gòu)域，其D1結(jié)構(gòu)域相對保守，可以被TLR5所識別。鞭毛蛋白在參與細菌的致病機理和機體對其免疫應答中都有重要作用。
　　自然殺傷（NK）細胞是一種固有免疫細胞，除了經(jīng)典的免疫監(jiān)視，免疫防御作用外，它也能分泌多種的細胞因子來調(diào)節(jié)免疫反應。研究NK細胞的活性變化，一個重要的指標就是NK細胞的

2、細胞毒性作用，NK92細胞對K562細胞的殺傷實驗以及小鼠NK細胞對Yac-1細胞的殺傷實驗是檢測NK細胞胞毒作用的經(jīng)典實驗。
　　嗜堿粒細胞是機體內(nèi)數(shù)量最少的白細胞，但是最近的研究表明，嗜堿粒細胞并非可有可無的細胞，該細胞在過敏疾病中的作用越來越受到研究者的注意。有證據(jù)顯示，在初始T細胞（naive T cell）向Th2細胞的分化過程中，嗜堿粒細胞可以提供一部分的關(guān)鍵細胞因子—IL-4，而IL-4的分泌變化也是考量嗜堿粒細胞細

3、胞活性的標志之一。
　　目的：
　?。?）轉(zhuǎn)化Flic-PET30a至BL21細菌,刺激BL21表達來自于傷寒沙門氏菌的鞭毛蛋白并純化獲取該蛋白。
　?。?）研究該鞭毛蛋白對BMDC，BMMφ，NK細胞和BM-basophils的功能影響。
　　方法：
　?。?）采用分子克隆經(jīng)典方法轉(zhuǎn)化Flic-PET30a質(zhì)粒到BL21細菌，擴增并用IPTG誘導其表達Flic蛋白。
　?。?）依據(jù)“蛋白HIS標簽”

4、與鎳柱有高親和力，并且可以被特定咪唑濃度緩沖液洗脫的特點純化獲得較高純度的Flic蛋白。
　?。?）用Flic蛋白刺激小鼠BMDC和BMMφ來測定其分泌TNF-α分泌水平是否增加。
　　（4）用Flic蛋白刺激NK92，小鼠脾來源NK細胞，檢測其是否對NK細胞胞毒作用有影響。
　?。?）用Flic蛋白刺激小鼠BM-basophils，檢測其IL-4分泌水平是否增加。
　　結(jié)果：
　　（1）表達并純化獲取了來