斑點(diǎn)叉尾鮰魚皮膠原蛋白理化特征及復(fù)合材料的研究.pdf

1、本文研究了斑點(diǎn)叉尾鮰魚皮酸溶性和酶溶性膠原蛋白的理化特性，并將提取得到的膠原蛋白進(jìn)行加工得到膠原蛋白生物復(fù)合材料，對合成的復(fù)合材料的細(xì)胞相容性進(jìn)行初步研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.膠原蛋白提取和理化特性研究
　　 (1)用乙酸和乙酸-胃蛋白酶方法，分別提取魚皮中的酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白，分別對膠原蛋白中羥脯氨酸含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明提取得到的酸溶性純度高達(dá)93.11％，酶溶性純度高達(dá)93.46％。使用乙酸和

2、乙酸-胃蛋白酶提取的方法可以得到純度較高的膠原蛋白。
　　 (2)對提取得到的膠原蛋白分別進(jìn)行紫外光譜分析、傅里葉紅外光譜分析和SDS-PAGE電泳測定。結(jié)果表明，酸溶性和酶溶性膠原蛋白具備Ⅰ型膠原蛋白的特征，屬于Ⅰ型膠原蛋白，具有完整的三螺旋結(jié)構(gòu)。
　　 (3)對膠原蛋白進(jìn)行變性溫度測定和氨基酸分析，結(jié)果表明斑點(diǎn)叉尾鮰膠原蛋白中含有大量的甘氨酸，但其變性溫度和羥脯氨酸含量均低于哺乳動(dòng)物膠原蛋白。同時(shí)，酸溶性膠原蛋白和酶

3、溶性膠原蛋白的變性溫度和氨基酸含量也有一定的區(qū)別。
　　 2.膠原蛋白生物復(fù)合材料制備與理化特性研究
　　 (1)采用原位合成的方法，得到膠原蛋白生物復(fù)合材料，并用0.25％戊二醛對得到的復(fù)合材料進(jìn)行交聯(lián)。
　　 (2)對復(fù)合材料進(jìn)行XRD分析，發(fā)現(xiàn)用原位合成的方法得到的復(fù)合材料中的羥基磷灰石屬于弱結(jié)晶，結(jié)晶度較低。低結(jié)晶度的復(fù)合材料將在一定程度上有利于其自身在生物體內(nèi)的的生物降解性能，同時(shí)有利于細(xì)胞在復(fù)合材料上

4、的粘附和增殖。
　　 (3)對復(fù)合材料進(jìn)行電鏡掃描、孔隙率測定，結(jié)果表明，復(fù)合材料孔隙率均在90％以上，具有多孔性且外觀形狀規(guī)則，孔徑大小適宜，同時(shí)有足夠的內(nèi)部表面積供細(xì)胞貼附。當(dāng)膠原蛋白和羥基磷灰石比例為50∶50時(shí)，孔徑一般在40～100μm，孔隙之間有較好的連通性，可以很好的排出代謝廢物，且有利于營養(yǎng)物質(zhì)的交換。當(dāng)膠原蛋白和羥基磷灰石比例為30∶70時(shí)，孔徑一般在20μm左右，而孔壁明顯變厚。
　　 3.不同配比的

5、膠原蛋白生物復(fù)合材料細(xì)胞相容性研究
　　 (1)使用膠原蛋白復(fù)合材料的浸提液對MC3T3進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞逐漸出現(xiàn)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞進(jìn)行大量的有絲分裂，培養(yǎng)到第7天，細(xì)胞增長越來越密集，呈現(xiàn)瓦狀排列，基本融合成單層細(xì)胞。而在30∶70ASC復(fù)合材料的一組中，細(xì)胞生長狀態(tài)不好，表明該組復(fù)合材料具有一定的細(xì)胞毒性。
　　 (2)采用MTT法，對各組復(fù)合材料浸提液中的細(xì)胞增殖率進(jìn)行測定。隨著培養(yǎng)時(shí)間延