基于《傷寒論》瘀、熱、毒證治理論探討抗炎寶逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞多藥耐藥研究.pdf

1、熱邪，瘀血、毒邪三者之間密切相關(guān)。熱能蘊(yùn)毒、瘀血蘊(yùn)久亦可化毒，從而形成熱瘀毒交夾的病理狀況。因此也增加了疾病的急驟性，纏綿性和疑難性。治療方面，既要熱毒瘀三者并治，又需分清其孰輕孰重、孰先孰后，尋因隸本，抓主要矛盾。
　　 熱灼津液，津液停留而成痰濁，血行被遏而成瘀血，層層相固，凝聚成塊，日以積大，形成癥瘕、腫塊、結(jié)節(jié)等。瘀熱毒交結(jié)，有形成積聚、癥瘕的病理特點(diǎn)。
　　 傷寒論中存在對(duì)熱邪，瘀血、毒邪三種病邪及其之間密切相

2、關(guān)的大量闡釋?zhuān)⑦\(yùn)用在疾病的治療過(guò)程中。通過(guò)本課題理論探討發(fā)現(xiàn)熱邪、瘀血、毒邪三者之間密切相關(guān)，瘀熱毒交結(jié)是形成積聚、癥瘕的重要病機(jī)。同時(shí)，熱邪、瘀血、毒邪與腫瘤病理進(jìn)程中腫瘤細(xì)胞多藥耐藥病理機(jī)制密切相關(guān)。
　　 此外，本課題進(jìn)一步探討了腫瘤細(xì)胞多藥耐藥產(chǎn)生的原因及病理機(jī)制。對(duì)當(dāng)前腫瘤多藥耐藥的治療現(xiàn)狀進(jìn)行了梳理。腫瘤細(xì)胞的耐藥性是導(dǎo)致化療失敗的重要因素。多藥耐藥機(jī)制是多方面的，目前已知的腫瘤多藥耐藥主要機(jī)制有藥物隔離外排，如P

3、-糖蛋白(P-gp)的高表達(dá)；藥物代謝，如谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶解毒作用增強(qiáng)；藥物靶位點(diǎn)改變，如拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ水平降低；細(xì)胞凋亡調(diào)控，如野生型p53基因的缺乏或突變等。
　　 目前，腫瘤多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)主要有三種措施：西藥逆轉(zhuǎn)、基因治療及中藥逆轉(zhuǎn)。西藥逆轉(zhuǎn)劑由于毒副作用大、療效不肯定，還不能推廣到臨床進(jìn)行大規(guī)模應(yīng)用；基因治療尚停留在實(shí)驗(yàn)室研究水平，沒(méi)有臨床研究報(bào)道，離臨床應(yīng)用尚有時(shí)日；而中藥恰好相反，藥性緩和，毒副作用小，且較多研究表明一些

4、中藥對(duì)化療具增效減毒作用，因而可能從中藥中找到高效低毒的MDR逆轉(zhuǎn)劑。
　　 基于此，本課題研究選取人胃癌普通細(xì)胞株SGC7901和耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP。其中SGC7901/DDP細(xì)胞是通過(guò)逐量順鉑(DDP)誘導(dǎo)而成，對(duì)DDP有較明顯的耐受性，能在含0.5mg·L-1順鉑的培養(yǎng)液中持續(xù)增殖，且對(duì)阿霉素、長(zhǎng)春新堿均產(chǎn)生明顯耐藥，具有顯著多藥耐藥特征。本實(shí)驗(yàn)用MTT法測(cè)定普通株SGC7901細(xì)胞及其耐藥株SGC7901/

5、DDP細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性，DDP治療SGC7901的IC50為0.326mg·L-1，SGC7901/DDP細(xì)胞的IC50為1.571mg·L-1，其對(duì)DDP的耐受性是SGC7901細(xì)胞的4.82倍，表明SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)DDP有較明顯的耐受性，符合耐藥細(xì)胞株特點(diǎn)，說(shuō)明本研究已成功構(gòu)建多藥耐藥細(xì)胞模型。進(jìn)而經(jīng)900抗炎寶加味丸干預(yù)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性測(cè)定研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)KYB在培養(yǎng)體系中的濃度為1×10-5g·ml-1時(shí)，SGC7

6、901及SGC7901/DDP細(xì)胞的存活率分別為91.49％和94.26%，即在此劑量時(shí)KYB對(duì)SGC7901和SGC7901/DDP細(xì)胞無(wú)明顯毒性。因此，確定以1×10-5g·ml-1作為KYB非細(xì)胞毒性藥物濃度，在此濃度下觀(guān)察KYB干預(yù)胃癌細(xì)胞多藥耐藥的效應(yīng)及其機(jī)制。
　　 當(dāng)1×10-5g·ml-1KYB與DDP協(xié)同作用時(shí)，DDP干預(yù)SGC7901/DDP細(xì)胞的IC50下降為0.374mg·L-1，耐藥倍數(shù)顯著降低，表明K

7、YB可降低耐藥細(xì)胞SGC7901/DDP的存活率，增加其對(duì)DDP的敏感性。且KYB對(duì)普通細(xì)胞株SGC7901亦有增敏作用，增敏倍數(shù)為3.02。
　　 為進(jìn)一步明確KYB實(shí)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥的效應(yīng)機(jī)制，本課題研究著眼于腫瘤多藥耐藥的關(guān)鍵環(huán)節(jié)P-gp過(guò)度表達(dá)開(kāi)展相關(guān)研究。腫瘤多藥耐藥過(guò)程中P-gp過(guò)度表達(dá)可導(dǎo)致抗腫瘤藥物外排增加，使細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積減少。
　　 通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SGC7901細(xì)胞內(nèi)DDP平均熒光強(qiáng)度

8、為1035.71，SGC7901/DDP細(xì)胞內(nèi)DDP熒光強(qiáng)度為327.76，較SGC7901細(xì)胞低3.16倍（p＜0.05）；SGC7901細(xì)胞P-gp表達(dá)陽(yáng)性率為10.81%，SGC7901/DDP細(xì)胞P-gp表達(dá)陽(yáng)性率為44.21%，明顯高于普通細(xì)胞株（P＜0.01），說(shuō)明SGC7901/DDP細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生及細(xì)胞內(nèi)DDP含量的降低與P-gp表達(dá)增高所致的細(xì)胞內(nèi)藥物隔離外排有關(guān)。而研究中以900抗炎寶加昧丸干預(yù)后，SGC7901/