纖維蛋白膠攜載的粒細胞集落刺激因子促進大鼠缺血后肢血管再生的作用.pdf

1、目的：研究肌注纖維蛋白膠攜載的粒細胞集落刺激因子(Gel+G-CSF)對大鼠外周血白細胞總數(shù)和缺血下肢血管再生的影響。
　　 材料與方法：
　　 1、于EP管中將纖維蛋白膠主體(加入了G-CSF)和催化劑混合制成凝膠塊，加入PBS液，于37℃下恒溫孵育。分別于24、48、72、96 h各時間點用ELISA試劑盒檢測PBS釋放液中G-CSF濃度，計算G-CSF的累積釋放率。
　　 2、雄性SD大鼠30只，制成大鼠后

2、肢缺血模型，成模后隨機分3組：Gel+G-CSF組(n=10)、G-CSF組(n=10)和PBS組(n=10)，分別肌肉注射Gel+G-CSF、G-CSF和PBS。于造模術(shù)前及術(shù)后第1、3、5、7天計數(shù)外周血白細胞總數(shù)，于造模后的第1周和第4周每組分別處死5只大鼠，取肌組織冰凍切片行堿性磷酸酶染色、蘇術(shù)素染色、α-SMA和VEGF免疫組化染色，觀察毛細血管、細胞浸潤情況、α-SMA陽性血管和VEGF表達情況；計數(shù)毛細血管和α-SMA陽性

3、血管密度。
　　 結(jié)果：
　　 1、Gel+G-CSF體外釋放情況：Gel+G-CSF在24h、48h和72h的累計釋放率約52.5±4.50％、76.3±4.47％、87.9±4.38％，Gel±G-CSF在72h內(nèi)逐漸緩釋出大部分的G-CSF。
　　 2、外周血白細胞數(shù)的變化：Gel+G-CSF組外周血白細胞總數(shù)在術(shù)后第1天達峰值(14.69±1.11×109/L)且明顯低于G-CSF組在術(shù)后第3天達到的峰值

4、(21.00±2.26×109/L)。
　　 3、促血管再生作用：Gel+G-CSF組(686±108/mm2)的毛細血管密度明顯高于G-CSF組(491±110/mm2)和PBS組(252±78/mm2)，P<0.05。Gel+G-CSF組(6.1±0.8/mm2)的α-SMA陽性血管密度明顯高于PBS組(2.6±1.3/mm2)，P<0.05。
　　 4、促細胞浸潤及VEGF表達作用：Gel+G-CSF組肌組織內(nèi)浸潤