上皮性卵巢癌中RET基因突變的檢測與分析.pdf

1、背景：卵巢癌是女性生殖器常見的腫瘤之一，發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮體癌而列居第三位，但是其死亡率卻居首位，對婦女生命造成嚴重威脅。卵巢癌患者死亡率居高不下主要是由于卵巢癌生長部位隱蔽，患病初期很少出現(xiàn)癥狀，以致早期診斷困難，確診時約70％已屬晚期，而這些患者的5年生存率只有30％。因此研究卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機制以尋找早期診斷及預防方法，探索有效的綜合療法，是提高生存率、降低死亡率的關鍵。同其他腫瘤一樣，卵巢癌的發(fā)生發(fā)展亦是與細胞增殖分化相關

2、的原癌基因、抑癌基因多階段相互作用的結果。充分認識卵巢癌特異性基因損害的機制有利于制定合理的基因診斷與治療方案。RET原癌基因編碼一種跨膜的酪氨酸蛋白激酶受體，參與多種細胞內信號傳導途徑，從而調節(jié)細胞的存活、增殖及分化等過程。RET基因可因突變或重排而活化，導致細胞異常增殖而形成腫瘤，已經(jīng)證實與多種人類癌癥密切相關。
　　 目的：本研究旨在檢測RET原癌基因在上皮性卵巢癌中的突變情況，分析其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，以期尋找

3、卵巢癌早期篩查和診斷的指標。
　　 方法：選取69例上皮性卵巢癌組織和11例正常卵巢組織，所有標本均經(jīng)病理證實，且術前未進行化療。手術切除標本立即置液氮速凍，后轉-80℃保存。提取組織DNA，應用PCR技術對RET基因的20個外顯子進行擴增，并對PCR產(chǎn)物序列直接進行雙向測序。應用SeqScape v2.5序列分析軟件對測序結果進行分析，然后提取RET突變患者石蠟包埋的正常組織DNA進行RET基因測序分析。
　　 結果：

4、69例卵巢癌標本中檢測出3種新的RET基因突變：第8外顯子525密碼子由CGG突變?yōu)閁GG，所編碼氨基酸由精氨酸變?yōu)樯彼?Arg525Trp)；第11外顯子641密碼子由GCU突變?yōu)锳CU，所編碼氨基酸由丙氨酸變?yōu)樘K氨酸(Ala641Thr)；第18外顯子1009密碼子由AUG突變?yōu)锳CG，所編碼氨基酸由蛋氨酸變?yōu)樘K氨酸(Met1009Thr)。3種突變均為雜合性錯義點突變，總突變率均為4.35％(3/69)，正常卵巢中未檢測到這3種

5、突變，但兩組標本中RET基因突變率無顯著性差異(x2=0.02，P>0.05)。在RET基因突變患者正常組織中未檢測到RET基因突變，說明突變屬于體細胞突變。另外，在所有標本檢測出三種已知的RET基因非同義單核苷酸多態(tài)性改變(rs35118262、rs9282834和rs1799939)，在兩組標本中分布無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結論：上皮性卵巢癌組織中存在RET原癌基因體細胞突變，且突變位點為首次發(fā)現(xiàn)的新位點。但是