臍帶血間充質干細胞誘導分化為類許旺細胞修復大鼠坐骨神經損傷的實驗研究.pdf

1、背景：周圍神經缺損損傷在外科創(chuàng)傷中較為常見，其修復和功能重建一直是臨床上面臨的一大難題。在周圍神經缺損損傷治療中較為經典的方法是自體神經移植，盡管結果較為理想，但會造成供體神經區(qū)域的功能缺失，所以在臨床上無法推廣。因此，尋找新的神經來源來代替自體神經引起了較多關注。近年來，組織工程的發(fā)展為我們提供了新的方法。許旺細胞（SCs）是周圍神經主要的功能細胞，但是自體來源的SCs在取材方面較為困難，且在體外培養(yǎng)方面也存在困難,異體來源的SCs則

2、存在免疫排斥反應的問題，這些都限制了它們在臨床上的應用。人臍血間充質干細胞(Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cells,HUCBMSCs)在分離、培養(yǎng)、擴增等環(huán)節(jié)的成功,以及成功的誘導分化為類SCs,為組織工程修復周圍神經缺損損傷的種子細胞提供了一種新的選擇。
　　目的：評價將HUCBMSCs來源的類SCs作為種子細胞，修復大鼠坐骨神經15㎜缺損損傷的效果，為HUCBMSCs

3、在臨床上治療周圍神經損傷提供必要的實驗依據。
　　方法：⑴無菌條件下，收集足月產、正常胎兒的臍帶血，應用肝素抗凝，使用6％高分子量羥乙基淀粉沉降紅細胞，后應用人淋巴細胞分離液分離出臍血中單個核細胞，再應用Mesencult?培養(yǎng)基對分離出的單個核細胞進行培養(yǎng)、純化以及擴增，從而獲得MSCs，并通過流式細胞儀對細胞表型進行鑒定；⑵依次應用含β-ME+bFGF、RA、Forskolin+bFGF+PDGF-BB+NGF+Heregul

4、in的誘導液將臍帶血MSCs定向誘導分化為類SCs,并通過免疫細胞化學法，鑒定誘導后細胞的神經膠質細胞標志物S100b、GFAP、P75；⑶應用-196℃液氮反復凍融振蕩洗滌的方法對異體神經脫細胞處理，制備去細胞坐骨神經基膜管，修剪長度為15mm,調整類SCs密度為1×107/mL后，使用微量注射器將細胞注入去細胞基膜管中，制備成組織工程神經；⑷30只SD大鼠隨機分為3組,每組10只,A組:將類SCs復合去細胞神經基膜管后橋接15㎜坐骨

5、神經缺損；B組:僅用去細胞神經基膜管橋接15㎜神經損傷；C組:坐骨神經切下15㎜后原位縫合。8周后,進行大鼠大體觀察、坐骨神經功能指數測定、腓腸肌濕重測定、神經電生理功能檢測、組織學染色觀察等檢查對神經修復情況進行評價。
　　結果：①分離培養(yǎng)出的細胞高表達CD44、CD73，低表達或不表達CD34；②誘導后類SCs幾乎都表達神經膠質細胞標志物 S100b、GFAP和P75；③通過8周的動物實驗觀察，臍帶血MSCs來源的類SCs復合