臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為類許旺細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：周圍神經(jīng)缺損損傷在外科創(chuàng)傷中較為常見(jiàn)，其修復(fù)和功能重建一直是臨床上面臨的一大難題。在周圍神經(jīng)缺損損傷治療中較為經(jīng)典的方法是自體神經(jīng)移植，盡管結(jié)果較為理想，但會(huì)造成供體神經(jīng)區(qū)域的功能缺失，所以在臨床上無(wú)法推廣。因此，尋找新的神經(jīng)來(lái)源來(lái)代替自體神經(jīng)引起了較多關(guān)注。近年來(lái)，組織工程的發(fā)展為我們提供了新的方法。許旺細(xì)胞（SCs）是周圍神經(jīng)主要的功能細(xì)胞，但是自體來(lái)源的SCs在取材方面較為困難，且在體外培養(yǎng)方面也存在困難,異體來(lái)源的SCs則

2、存在免疫排斥反應(yīng)的問(wèn)題，這些都限制了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用。人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cells,HUCBMSCs)在分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增等環(huán)節(jié)的成功,以及成功的誘導(dǎo)分化為類SCs,為組織工程修復(fù)周圍神經(jīng)缺損損傷的種子細(xì)胞提供了一種新的選擇。
　　目的：評(píng)價(jià)將HUCBMSCs來(lái)源的類SCs作為種子細(xì)胞，修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)15㎜缺損損傷的效果，為HUCBMSCs

3、在臨床上治療周圍神經(jīng)損傷提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴無(wú)菌條件下，收集足月產(chǎn)、正常胎兒的臍帶血，應(yīng)用肝素抗凝，使用6％高分子量羥乙基淀粉沉降紅細(xì)胞，后應(yīng)用人淋巴細(xì)胞分離液分離出臍血中單個(gè)核細(xì)胞，再應(yīng)用Mesencult?培養(yǎng)基對(duì)分離出的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、純化以及擴(kuò)增，從而獲得MSCs，并通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定；⑵依次應(yīng)用含β-ME+bFGF、RA、Forskolin+bFGF+PDGF-BB+NGF+Heregul

4、in的誘導(dǎo)液將臍帶血MSCs定向誘導(dǎo)分化為類SCs,并通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法，鑒定誘導(dǎo)后細(xì)胞的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物S100b、GFAP、P75；⑶應(yīng)用-196℃液氮反復(fù)凍融振蕩洗滌的方法對(duì)異體神經(jīng)脫細(xì)胞處理，制備去細(xì)胞坐骨神經(jīng)基膜管，修剪長(zhǎng)度為15mm,調(diào)整類SCs密度為1×107/mL后，使用微量注射器將細(xì)胞注入去細(xì)胞基膜管中，制備成組織工程神經(jīng)；⑷30只SD大鼠隨機(jī)分為3組,每組10只,A組:將類SCs復(fù)合去細(xì)胞神經(jīng)基膜管后橋接15㎜坐骨

5、神經(jīng)缺損；B組:僅用去細(xì)胞神經(jīng)基膜管橋接15㎜神經(jīng)損傷；C組:坐骨神經(jīng)切下15㎜后原位縫合。8周后,進(jìn)行大鼠大體觀察、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)測(cè)定、腓腸肌濕重測(cè)定、神經(jīng)電生理功能檢測(cè)、組織學(xué)染色觀察等檢查對(duì)神經(jīng)修復(fù)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：①分離培養(yǎng)出的細(xì)胞高表達(dá)CD44、CD73，低表達(dá)或不表達(dá)CD34；②誘導(dǎo)后類SCs幾乎都表達(dá)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物 S100b、GFAP和P75；③通過(guò)8周的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察，臍帶血MSCs來(lái)源的類SCs復(fù)合