Rin1在膀胱尿路上皮癌中的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：
　　 膀胱尿路上皮癌是泌尿外科的常見惡性腫瘤,其特點是易復(fù)發(fā),當腫瘤侵及肌層時無有效的診斷方法。膀胱惡性腫瘤中最常見的類型是尿路上皮癌,其余為鱗癌和腺癌等少見類型。雖然膀胱癌的治療水平逐年提高,但是其死亡率仍然增加。腫瘤的分期和分級常作為預(yù)后的判斷指標,但是這些指標特異性和敏感性較差。
　　 RIN1基因位于染色體11q13.2位點,分子編碼區(qū)結(jié)構(gòu)2352bp。RIN1最初作為Ras蛋白的效應(yīng)因子被發(fā)現(xiàn)的,近年來

2、發(fā)現(xiàn)其在介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面發(fā)揮著重要的作用。RIN1一方面可以激活A(yù)BL酪氨酸激酶發(fā)揮其抑制細胞骨架蛋白重構(gòu)的抗侵襲功能:RIN1還與胰島受體信號通路的傳導(dǎo)和IL-3受體信號傳導(dǎo)通路相關(guān)。另一方面可以與RAB5蛋白結(jié)合介導(dǎo)EGFR、TβR等載體的內(nèi)吞和再循環(huán)過程,使得EGF、TGF-β等信號得以傳導(dǎo)下去,發(fā)揮其相關(guān)功能。
　　 研究發(fā)現(xiàn)RIN1在結(jié)腸癌中有著高水平的表達。然而,在乳腺癌中RIN1的表達卻是減少或缺失,研究中還發(fā)現(xiàn)S

3、nail能夠抑制RIN1的表達,阻滯受體內(nèi)吞再循環(huán)來阻斷信號的傳導(dǎo),促進乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,并認為在乳腺癌中RIN1扮演著一個抑癌基因的角色。因此,RIN1在不同腫瘤中的表達是矛盾的。
　　 這些研究均提示RIN1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的重要作用,但是在人類膀胱尿路上皮癌中RIN1的研究仍未見報道。本研究通過檢測膀胱尿路上皮癌及正常膀胱組織中RIN1的表達情況,探討膀胱尿路上皮癌中RIN1蛋白表達與病理分期,臨床分期,腫瘤大小,腫瘤

4、復(fù)發(fā),腫瘤進展及Ki-67表達的相關(guān)性。尋找與膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)的分子標記物,為膀胱尿路上皮癌的診斷,惡性程度評估及預(yù)后治療研究提供新的思路。
　　 方法：
　　 收集2010年7月-2010年11月中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的20對新鮮膀胱尿路上皮癌及癌旁正常組織。收集2004年5月-2008年11月中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的96例原發(fā)性膀胱尿路上皮癌標本和22例癌旁正常組織標本,

5、年齡38～71歲,平均55歲,其中69例為男性,27例為女性。所有組織用10%福爾馬林固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,厚度4μm。生存期計算從手術(shù)日期到隨訪結(jié)尾日期,或由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。癌旁組織距離腫瘤邊緣大于5cm,所有上述患者術(shù)前均未接受放療,化療。
　　 本實驗通過實時定量PCR技術(shù)檢測RIN1在膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中的表達;再通過免疫蛋白印跡技術(shù)檢測方法與實時定量PCR的檢測結(jié)果相互認證;免疫組化法檢測RIN

6、1蛋白在癌組織中表達的位置及其強弱;通過檢測Ki-67的表達,觀察腫瘤細胞增殖與RIN1的相關(guān)性;統(tǒng)計分析尿路上皮癌中RIN1蛋白表達與生存時問,復(fù)發(fā),進展等特征的關(guān)系;Cox比例風險回歸模型分析RIN1與無進展生存期,無復(fù)發(fā)生存期和總體生存期的預(yù)后因素關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 Real-timePCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),在20對新鮮的膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中,有16對的癌組織中R1N1表達高于癌旁組織。在膀胱尿路上皮癌組織中

7、,RIN1的mRNA表達平均倍數(shù)為(11.48±5.71),在癌旁組織中表達平均倍數(shù)(4.56±1.95)(P=0.004)。Westernblot結(jié)果認證了RIN1在尿路上皮癌組織中的表達是升高的。
　　 免疫組化法發(fā)現(xiàn),RIN1蛋白主要在癌細胞的胞漿和胞核中表達,出現(xiàn)黃色或棕黃色的細小顆粒著色為陽性細胞。在正常組織染色評分中RIN1蛋白有很少的細胞染色(根據(jù)我們的評分標準≤2分),將其視為正常表達。而尿路上皮癌中的RIN1表

8、達隨著惡性程度的增高而逐漸升高。免疫組化法檢測Ki-67時發(fā)現(xiàn),Ki-67的表達與RIN1標記的惡性程度呈正相關(guān)性(R=0.232,P=0.023)。RIN1表達的高低與病理分級(P=0.004),臨床分期(P=0.046),腫瘤進展(P=0.047)相關(guān),而與年齡,性別,腫瘤大小,是否多發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P＞0.05)。RIN1表達的陽性率在PUNLMP,LGPUC,HGUC病理分級中分別是15.4%,48.0%,65.5%(P

9、＜0.05)。在臨床分期的分析中發(fā)現(xiàn)pTa,T1,T2-T4中RIN1的陽性率分別為39.5%,57.7%,68.7%,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 通過生存分析法來辨別RIN1對生存時間的影響,在RIN1高表達組中發(fā)現(xiàn)5年生存率為29%,平均生存期為43.6±4.2個月。而在RIN1低表達組中5年生存率為43%,平均生存期為55.3±4.4個月,Log-rank檢驗發(fā)現(xiàn)總體生存期間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.046

10、)。因此,低表達的RIN1組獲得更長的生存時間。在生存期評估中發(fā)現(xiàn)高表達的RIN1蛋白與腫瘤復(fù)發(fā)無相關(guān)性(P=0.261),而與腫瘤的進展有差異性(P=0.036)。
　　 通過Cox比例風險回歸多因素分析膀胱尿路上皮癌患者的無進展生存期,無復(fù)發(fā)生存期和總體生存期后發(fā)現(xiàn),在總體生存期中高表達RIN1的相對風險度為3.22(950CI1.17-8.88),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.023)。通過分析RIN1的表達與無進展生存期和

11、無復(fù)發(fā)生存期的關(guān)系,我們發(fā)現(xiàn)對于RIN1低表達和高表達的無進展生存期,其相對危險度為20.18(95%CI2.79-146.11,P=0.003);而對于無復(fù)發(fā)生存期,其相對危險度為3.97(95%C10.93-16.95,P=0.063)。RIN1可以作為生存與進展的獨立預(yù)后因素,RIN1的表達可以作為膀胱尿路上皮癌一個潛在的預(yù)后因素。
　　 結(jié)論：
　　 1.RIN1在膀胱尿路上皮癌組織中的mRNA和蛋白的表達水平高