蟾蜍靈對血管內皮細胞EAhy926增殖和誘導凋亡的研究.pdf

1、本論文以人血管內皮細胞EAhy926為靶細胞，通過一系列的研究，觀察蟾蜍靈作為鈉泵抑制劑對血管內皮細胞增殖與死亡的形態(tài)學特征；測定了蟾蜍靈對EAhy926細胞周期的影響以及細胞內游離的Ca2+、Na+、K+濃度的變化；通過RT-PCR技術檢測了蟾蜍靈作用細胞前后對鈉泵α1亞單位、β1亞單位、Caspase3和Bcl-2 mRNA表達的影響，為探討蟾蜍靈在血管內皮細胞凋亡與死亡過程中的特征和機制奠定了基礎。
　　 我們在體外培養(yǎng)血

2、管內皮細胞EAhy926，將不同濃度的蟾蜍靈作用細胞0～72小時，結果發(fā)現蟾蜍靈對EAhy926細胞生長具有明顯的抑制作用；且在0.0625～1μmol/L范圍內呈時間、劑量依賴性；熒光顯微鏡下可見0.1μmol/L的蟾蜍靈作用24 h可誘導EAhy926細胞凋亡，作用48 h可引起細胞部分壞死；流式細胞術檢測出典型的“凋亡峰”，凋亡率8.2％～36.5％，且呈時間依賴性(P<0.01)；細胞周期分析顯示，0.1μmol/L蟾蜍靈能顯著

3、影響血管內皮細胞EAhy926的細胞周期，在0-36 h范圍內G0/G1期細胞比例隨藥物作用時間的延長而逐漸遞減，而S期細胞比例隨藥物作用時間的延長而逐漸增高，呈時間依賴性變化(P<0.05)；半定量RT-PCR顯示Caspase3 mRNA表達較對照組明顯增強(P<0.05)，Bcl-2mRNA表達較對照組明顯減弱(P<0.05)，且二者均呈劑量依賴性。激光共聚焦顯微鏡下觀察到蟾蜍靈可使EAhy926細胞內Na+濃度升高，K+濃度降低