SMCC法抗體定向偶聯(lián)技術(shù)的優(yōu)化與應(yīng)用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)偶聯(lián)技術(shù)是采用一定的技術(shù)手段將具有生物活性的蛋白質(zhì)與其它載體分子或標記物結(jié)合在一起的一種方法，在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。在標記免疫分析方法中，抗體與酶等標記物的偶聯(lián)效果會直接影響到免疫方法的靈敏度和可靠性。
　　 常用的偶聯(lián)方法如戊二醛法、碳二亞胺法、過碘酸鈉氧化法法等不可避免地會產(chǎn)生酶或抗體的自身交聯(lián)產(chǎn)物或多聚物，致使偶聯(lián)效率降低、結(jié)合物活性減弱。在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的異性雙功能偶聯(lián)劑雖然可以克服這一不足，但酶在

2、抗體上的連接位點具有隨機性，導(dǎo)致抗體和酶的活性會受到影響。因此，在實際應(yīng)用中，需建立一種能定向偶聯(lián)的抗體偶聯(lián)技術(shù)。
　　 本研究采用SMCC法，研究優(yōu)化了免疫球蛋白IgG與辣根過氧化物酶HRP的偶聯(lián)條件，主要研究內(nèi)容包括：
　　 1)采用體內(nèi)誘生腹水法制備氯霉素單克隆抗體，并對其活性進行測定，建立競爭曲線。
　　 2)從投料比、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間三個方面對抗體的DTT還原反應(yīng)過程進行了研究，探討了還原條件對免疫球

3、蛋白的結(jié)構(gòu)、活性等方面的影響。
　　 3)采用SMCC法將抗體與HRP偶聯(lián)，并對其活性進行鑒定，并將其用于酶聯(lián)免疫吸附實驗。
　　 研究結(jié)果表明，DTT還原反應(yīng)的溫度和時間對抗體結(jié)構(gòu)和活性影響不大，而DTT的加入量則有明顯影響：在封閉巰基的條件下，投料比小于為600時，還原產(chǎn)物以大分子片段居多，當(dāng)投料比大于600后，產(chǎn)物主要為小分子片段，且抗體活性開始下降，到6000時活性幾乎完全喪失；在未封閉巰基條件下，由于游離巰基會