實時定量RT-PCR檢測多種肝細胞癌和胃癌細胞系MiR-17-92基因簇的表達.pdf

1、目的：
　　 miR-17-92為一個高度保守的基因簇,編碼miR-17.5p,miR-17-3p,miR-18,miR-19a,miR-20,miR-19b和miR-92-1共七個miRNA,位于人的第13號染色體上C13orf25基因第三內(nèi)含子區(qū)。miR-17-92基因簇參與哺乳動物多個器官發(fā)育并與多種實體瘤的發(fā)生密切相關(guān)。到目前為止,對miR-17-92的研究主要集中在肺癌,尤其是小細胞肺癌和惡性淋巴瘤,對肝胃等消化道惡性

2、腫瘤的研究很少。本研究采用實時定量RT-PCR技術(shù)檢測多種肝細胞癌和胃癌細胞系miR-17-92基因簇的表達水平,并以正常肝細胞系(L-02)和正常胃粘膜細胞系(GES-1)作為對照,初步探討miR-17-92基因簇異常表達與肝細胞癌和胃癌發(fā)生的關(guān)系及其作用。
　　 方 法
　　 培養(yǎng)Bel7402,Hep G2肝癌細胞系,L-02正常肝細胞系,AGS,MKN-1,MKN-28,SGC-7901,MKN-45,MGC.8

3、03,BGC-823七株胃癌細胞系和GES-1正常胃粘膜細胞系,其中AGS,MKN-1,MKN-28為高分化癌,SGC-7901,MKN-45.MGC-803,BGC-823為低分化癌。待細胞進入對數(shù)生長期后,收集約1x105細胞,TRIzol法提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后,以DEPC水做空白對照,L-02正常肝細胞系總RNA做陰性對照,HL-60白血病細胞系做陽性對照,運用TaqMan探針實時定量PCR技術(shù)檢測miR-17-92基因簇在上述

4、各細胞系中的表達情況,應用2-△△Ct法計算miR-17-92基因相對表達量,明確各種肝細胞癌和胃癌細胞系與相應正常細胞系相比表達量差異。
　　 結(jié) 果
　　 低分化肝癌細胞系Hep G2 miR-17-92基因簇表達ct值平均值為22.62,高分化肝癌細胞系Bel7402 Ct值平均值為24.83,其中Hep G2表達量為Bel7402的3.86倍。而L-02正常肝細胞系不表達miR-17-92基因簇。與正常胃粘膜細胞

5、系GES-1相比,miR-17-92基因簇在七株胃癌細胞系中的表達均有不同程度的上調(diào),其中低分化株BGC-823表達量最高,為正常胃粘膜細胞系的6.23倍,低分化胃癌細胞系的miR-17-92基因表達相對倍數(shù)(4.29±1.36)明顯高于高分化胃癌細胞系(1.53±0.28),(p=0.02<0.05)。
　　 結(jié) 論
　　 1、miR-17-92基因簇在肝癌及胃癌細胞系中的表達均有不同程度的表達上調(diào),可能參與上述兩種常