糖皮質(zhì)激素類藥物在肝損傷大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　潑尼松(Prednisone，Pred)和甲潑尼龍(Methylprednisolone，MP)是廣泛應(yīng)用于臨床的兩種糖皮質(zhì)激素類藥物，潑尼松本身沒有藥理活性，需經(jīng)肝臟11β-羥基類固醇脫氫酶1(11β-hydroxysteroiddehydrogenase1，11β-HSD1)轉(zhuǎn)化為有活性的潑尼松龍繼而發(fā)揮作用。臨床上對于轉(zhuǎn)氨酶升高的肝功受損的病人醫(yī)生通常會選擇有活性的甲潑尼龍而不選擇潑尼松。本課題以四氯化碳致肝損傷

2、大鼠為研究對象，觀察肝損傷時(shí)潑尼松、潑尼松龍及甲潑尼龍藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)是否發(fā)生變化，探討肝損傷對Pred、潑尼松龍、MP藥動(dòng)學(xué)的影響，評價(jià)肝損傷時(shí)應(yīng)用潑尼松和甲潑尼龍是否需要調(diào)整劑量，為臨床上轉(zhuǎn)氨酶升高病人應(yīng)用潑尼松、潑尼松龍和甲潑尼龍時(shí)的有效性與安全性提供初步的動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法：
　　1.肝損傷大鼠模型的建立
　　肝損傷組大鼠腹腔注射40％CCl4溶液，24h后取血測定血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AL

3、T)、白蛋白(Alb)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、總膽紅素(TBIL)，并對大鼠解剖取肝臟，HE染色行病理學(xué)檢查，驗(yàn)證肝損傷模型是否成功。
　　2.潑尼松及潑尼松龍?jiān)谡＜案螕p傷大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　取24只SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，分別為潑尼松正常組(PS-C組)、潑尼松肝損傷組（PS-I組）、潑尼松龍正常組（PL-C組）和潑尼松龍肝損傷組（PL-I組），每組6只，雌雄各半。按照“肝損傷大鼠模型的建立”

4、項(xiàng)下方法建立肝損傷模型，24h后各正常組和肝損傷組分別灌胃給予潑尼松或潑尼松龍混懸液(15mg·kg-1)，于給藥后10min、20min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h取血。采用高效液相色譜法(HPLC)分析測定潑尼松龍的血藥濃度。
　　3.甲潑尼龍?jiān)谡＜案螕p傷大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　取12只SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為2組，分別為甲潑尼龍正常組(MP-C組)和甲潑尼龍肝損傷組

5、（MP-I組），每組6只，雌雄各半。按照“肝損傷大鼠模型的建立”項(xiàng)下的方法建立肝損傷模型，24h后正常組及肝損傷組灌胃給予甲潑尼龍混懸液(25mg·kg-1)，于給藥后15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、10h取血。采用高效液相色譜法(HPLC)分析測定甲潑尼龍的血藥濃度。
　　4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
　　對大鼠注射CCl4前后各生化指標(biāo)進(jìn)行雙側(cè)t檢驗(yàn);采用DASver2.0(Dru

6、gandStatisticsforWindows)程序軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，對各組主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0-t，AUC0-∞、MRT0-t，MRT0-∞、t1/2、Cmax、CL和V進(jìn)行雙側(cè)t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.肝損傷模型的建立
　　大鼠注射四氯化碳24h后，AST、ALT和TBIL明顯升高(P＜0.05)，Alb、γ-GT不變(P＞0.05);病理學(xué)檢查可見肝損傷大鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)保留，局部排列紊亂，中央靜脈周

7、圍組織輕度水腫，肝細(xì)胞索排列尚整齊，肝血竇未見明顯充血，切片內(nèi)未見明確門管區(qū)。
　　2.潑尼松龍及甲潑尼龍?bào)w內(nèi)測定方法的方法學(xué)考察
　　本實(shí)驗(yàn)所建立的潑尼松龍和甲潑尼龍的HPLC測定方法，樣品及內(nèi)標(biāo)峰形良好，血漿中雜質(zhì)峰不干擾樣品的測定;潑尼松龍?jiān)?.01027～5.125μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，甲潑尼龍?jiān)?.03109～1.4805μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;精密度、準(zhǔn)確度、回收率、穩(wěn)定性等均符合藥動(dòng)學(xué)研究

8、相關(guān)測定要求。
　　3.潑尼松藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及其統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果
　　對肝損傷組與正常對照組進(jìn)行雙側(cè)t檢驗(yàn)，潑尼松肝損傷組與正常組(Prednisone-InjurygroupVSPrednisone-Controlgroup,PS-I組VSPS-C組)相比，潑尼松活性潑尼松龍的各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無顯著性差異（P＞0.05）;
　　肝損傷影響亞組分析:將肝損傷組雄性與正常組雄性（PS-I-♂VSPS-C-♂）大鼠相比，肝損傷組雄

9、性大鼠的潑尼松龍的清除率CL顯著下降（26.18±6.182VS40.06±4.736L·h·kg-1，P＜0.05），其余各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;將肝損傷組雌性與正常組雌性（PS-I-♀VSPS-C-♀）大鼠相比，各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　　性別影響分析:將正常組內(nèi)雄性與正常組內(nèi)雌性（PS-C-♂VSPS-C-♀)大鼠比較，正常組內(nèi)雄性大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)CL、V顯著增大（P＜0.05），A

10、UC0-t、AUC0-∞、Cmax顯著減小(P＜0.05)，MRT0-∞、t1/2顯著縮短（P＜0.05）;將損傷組內(nèi)雄性與損傷組內(nèi)雌性（PS-I-♂VSPS-I-♀）大鼠比較，損傷組內(nèi)雄性大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)CL、V顯著增大(P＜0.05)，AUC0-t、AUC0-∞、Cmax顯著減小(P＜0.05)，MRT0-∞、t1/2顯著縮短(P＜0.05)，MRT0-t、Tmax無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.潑尼松龍藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及其統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果<

11、br>　　潑尼松龍肝損傷組與正常組(Prednisolone-InjurygroupVSPrednisolone-Controlgroup，PL-I組VSPL-C組)比較，各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)均無顯著性差異;肝損傷影響亞族分析:將潑尼松龍肝損傷組雄性與正常組雄性(PL-I-♂VSPL-C-♂)，潑尼松龍肝損傷組雌性與正常組雌性（PL-I-♀VSPL-C-♀）大鼠相比，各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無顯著性差異（P＞0.05）;
　　性別影響分析:將正

12、常組內(nèi)雄性與正常組內(nèi)雌性（PL-C-♂VSPL-C-♀性）大鼠比較，各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無顯著性差異(P＞0.05)，將肝損傷組內(nèi)雄性與肝損傷組內(nèi)雌性（PL-I-♂VSPL-I-♀）大鼠比較，肝損傷組內(nèi)雄性大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)CL明顯增加(P＜0.05)，AUC0-∞顯著減?。≒＜0.05），MRT0-t，MRT0-∞、t1/2均顯著縮短(P＜0.05)，其余參數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　5.甲潑尼龍藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及其統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果<

13、br>　　甲潑尼龍肝損傷組與正常組（MP-InjurygroupVSMP-Controlgroup，MP-I組VSMP-C組）比較，各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)均無顯著性差異;
　　肝損傷影響亞族分析:將甲潑尼龍肝損傷組雄性與正常組雄性(MP-I-♂VSMP-C-♂)比較，各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);甲潑尼龍肝損傷組雌性與正常組雌性（MP-I-♀VSMP-C-♀）比較，各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　　性

14、別影響分析:將正常組內(nèi)雄性與正常組內(nèi)雌性（MP-C-♂VSMP-C-♀）大鼠比較，正常組內(nèi)雄性大鼠的CL、V明顯增加（P＜0.05），AUC0-∞明顯減小（P＜0.05），其余藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);將肝損傷組內(nèi)雄性與肝損傷組內(nèi)雌性（MP-I-♂VSMP-I-♀）大鼠相比，肝損傷組內(nèi)雄性大鼠的Cmax明顯減?。≒＜0.05），其余藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)建立的C

15、Cl4誘導(dǎo)的急性肝損傷大鼠模型穩(wěn)定，該模型可用于肝損傷對藥物代謝影響的研究;
　　2.本實(shí)驗(yàn)建立的潑尼松龍和甲潑尼龍?bào)w內(nèi)測定方法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、回收率高，適合潑尼松龍和甲潑尼龍?bào)w內(nèi)血藥濃度的測定;
　　3.肝損傷可影響潑尼松在雄性大鼠體內(nèi)的代謝，使?jié)娔崴傻幕钚源x產(chǎn)物潑尼松龍的清除率下降，而對于雌性大鼠，肝損傷時(shí)其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)未出現(xiàn)顯著性改變;肝損傷時(shí)潑尼松龍和甲潑尼龍?jiān)诖笫篌w內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)未出現(xiàn)顯著性改變;另外潑尼松、潑