三苯雙脒在中國(guó)健康志愿者體內(nèi)處置過(guò)程研究.pdf

1、目的： 1.考察三苯雙脒在模擬人胃腸道環(huán)境的穩(wěn)定性，確定三苯雙脒的分解部位和吸收形式。 2.研究三苯雙脒在人體內(nèi)的代謝物，確定其結(jié)構(gòu)，了解其體內(nèi)處置過(guò)程。 3.建立靈敏度高、專屬性強(qiáng)的HPLC-MS法測(cè)定人血漿中氨脒和乙酰氨脒的濃度；建立HPLC-UV法測(cè)定人尿液中氨脒、乙酰氨脒和對(duì)苯二甲酸的濃度。 4.進(jìn)行中國(guó)健康志愿者單次口服400mg三苯雙脒腸溶片藥代動(dòng)力學(xué)研究，包括氨脒及代謝產(chǎn)物乙酰氨脒和對(duì)苯二甲

2、酸，全面了解其人體內(nèi)處置過(guò)程。 方法： 1.將三苯雙脒在人工腸胃液中孵育不同時(shí)間，采用HPLC-UV法檢測(cè)孵育液中原形藥物和分解產(chǎn)物，以考察三苯雙脒的穩(wěn)定性。 2.收集健康志愿者口服三苯雙脒腸溶片后尿液和血樣，經(jīng)處理，用HPLC-MS/MS法進(jìn)行代謝物研究，通過(guò)一級(jí)全掃描、SIM、碎片離子掃描、母離子掃描、中性丟失掃描等步驟，確定代謝物的分子量和結(jié)構(gòu)。 3.血漿經(jīng)沉淀蛋白處理后檢測(cè)其中氨脒和乙酰氨脒濃度，

3、以乙腈-0.01M醋酸銨（含0.3％氨水）=80：20（V/V）為流動(dòng)相，采用Ultimate XB-C18色譜柱（150mm× 4.6mm，5μm），流速0.8 mL·min-1；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL；API-ES源，正離子模式，噴霧氣（N2）壓力50psi，干燥氣（N2）流速11.0L·min-1，干燥氣溫度為350℃，毛細(xì)管電壓4000V，選擇性監(jiān)測(cè)質(zhì)荷比（m/z）為178（氨脒）、220（乙酰氨脒）和370（氨磺必利，內(nèi)標(biāo)

4、），碎片電壓均為110V。 4.尿樣經(jīng)沉淀蛋白并稀釋后測(cè)定氨脒和乙酰氨脒濃度，以比卡魯胺為內(nèi)標(biāo)，以乙腈-水-三乙胺（60：40：0.2，V/VN）為流動(dòng)相，采用Agilent Zorbax Extend-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）分離，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)265nm流速0.7mL·min-1，進(jìn)樣量10μL；尿樣中對(duì)苯二甲酸的檢測(cè)是以阿魏酸為內(nèi)標(biāo)，流動(dòng)相為甲醇-水-醋酸（35：65：0.55，V/ V/V），采用Ulti

5、mate XB C18色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），紫外檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，流速0.8mL·min-1，進(jìn)樣量10μL。 5.篩選8名健康男性志愿者，于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院Ⅰ期臨床病房，空腹單次口服400mg苯雙脒腸溶片，留取血樣和尿樣，分別采用HPLC-MS和HPLC-UV法檢測(cè)血漿中氨脒和乙酰氨脒及尿樣中氨脒、乙酰氨脒和對(duì)苯二甲酸的濃度，采用DAS2.0實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)程序計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，同期觀察不良反應(yīng)。

6、 結(jié)果： 1.三苯雙脒在模擬人胃腸道環(huán)境不穩(wěn)定，尤其是在人工（NE）胃液中，孵育Omin即分解完全；在人工NE腸液中孵育15min分解完全，在人工腸液中孵育5min即檢測(cè)不到原形藥物。將孵育液進(jìn)行高效液相色譜分析，確定三苯雙脒分解成氨脒和對(duì)苯二甲醛。 2.健康志愿者口服三苯雙脒腸溶片后，其尿樣和血樣經(jīng)HPLC-MS/MS分析，確定三苯雙脒在人體內(nèi)除了分解產(chǎn)物氨脒外，還代謝成乙酰氨脒和對(duì)苯二甲酸等產(chǎn)物。 3.HP

7、LC-MS法同時(shí)測(cè)定人血漿中氨脒和乙酰氨脒的濃度，氨脒和乙酰氨脒分別在1～800ng·mL-1和0.5～500ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為Y=0.1881X+0.0092和Y=0.6658X+0.0155，最低定量限為1ng·mL-1和0.5ng·mL-1，絕對(duì)回收率為81.47％～84.05％和83.64％～86.71％，相對(duì)回收率為100.89％～101.41％和97.88％～110.68％，批內(nèi)、批間變異（RS

8、D）均小于8％，-20℃冷凍24h及7天和反復(fù)凍融均穩(wěn)定，RSD均小于8％。 4.HPLC-UV法同時(shí)測(cè)定人尿液中氨脒和乙酰氨脒濃度，氨脒和乙酰氨脒分別在0.5～500μg·mL-1和0.1～200μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.4785X+0.0030（r=0.99623）和Y=0.7158X-0.0019（r=0.99578），最低定量限為0.5μg·mL-1和0.1μg·mL-1，絕對(duì)回收率為94.78

9、％～95，23％和91.26％～96.99％，相對(duì)回收率為98.37％～101.44％和99.26％～102，06％，批內(nèi)、批間變異（RSD）均小于7％，-20℃冷凍24h及7天和反復(fù)凍融均穩(wěn)定，RSD均小于7％。 5.HPLC-UV法測(cè)定人尿液中對(duì)苯二甲酸濃度，對(duì)苯二甲酸在0.2～200μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.3638X-0.00111（r=0.99526），最低定量限為0.2μg·mL-1，絕對(duì)回

10、收率為93.18％～94.36％，相對(duì)回收率為99.58％～101.23％，批內(nèi)、批間變異（RSD）均小于5％，-20℃冷凍24h及7天和反復(fù)凍融均穩(wěn)定，RSD均小于8％。 6.志愿者單次口服400mg三苯雙脒腸溶片后，氨脒和乙酰氨脒的消除半衰期t1/2分別為5.382±2.145和7.087±2.060h；達(dá)峰時(shí)Tmax分別為5.250±1.254和7.125±2.416h；峰濃度Cmax分別為449.382±136.409和

11、148.304±117.131 ng·mL-1；血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC0～36分別為4655.038±1113.240和1904.929±976.805 ng·mL-1·h； AUC0～∞。分別為4768.901±1158.375和1989.491±1014.418ng·mL-1·h。 7.志愿者單次口服400mg三苯雙脒腸溶片后，氨脒、乙酰氨脒和對(duì)苯二甲酸48h尿累積排泄率分別為55.84％±13.60％、14.98％

12、±7.65％和56.09％±10.67％；氨脒和乙酰氨脒的總累積排泄率為70.82±9.83％；尿藥法（殘余藥量法）計(jì)算其半衰期t1/2分別為3.459±0.734h，4.213±0.431h和3.375±0.565h；尿藥排泄速率常數(shù)Ke分別為0.213±0.068h-1，0.166±0.017h-1和0.210±0.030h-1。 結(jié)論： 1.三苯雙脒在胃腸道環(huán)境不穩(wěn)定，分解成氨脒和對(duì)苯二甲醛，說(shuō)明三苯雙脒不是以原形