炎性標(biāo)志物表達(dá)水平與大腸癌進(jìn)展的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:大腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一,目前發(fā)病率有逐年上升的趨勢,雖然已經(jīng)對其進(jìn)行了廣泛的研究,但其發(fā)生、發(fā)展的確切機(jī)制尚不十分明確。
　　 本研究探討基質(zhì)金屬蛋蛋白酶-9(matri metalloproteinase-9,MMP-9)、環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2),Krüpple樣因子-5(krüpple-like factor,IKLF/KLF5)等腫瘤相關(guān)蛋白表達(dá)水平與大腸癌進(jìn)展的關(guān)

2、系。
　　 方法:
　　 1.PCR分析:應(yīng)用等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)鑒定大腸癌組和對照組的MMP-9基因Q279R和-1562(C/T)多態(tài)性及等位基因頻率分布。
　　 2.明膠酶圖分析:將正常及大腸癌組織于冰浴下勻漿,離心分離上清,蛋白定量后取蛋白提取液40μg,進(jìn)行明膠酶圖分析,檢測MMP-9活性。
　　 3.免疫組織化學(xué)染色:大腸癌組織用甲醛固定,做病理切片,進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,

3、觀察MMP-9、COX-2和KLF5在大腸癌組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1 MMP-9基因Q279R多態(tài)性與大腸癌發(fā)生無相關(guān)性
　　 在我們研究的143名對象(60例大腸癌和83例正常對照)中,Q279R位點(diǎn)均為GG型和AG型和AA型等位基因。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,AA基因型比例為8.3％(5/60)、AG基因型比例為43.3％(26/60)、GG基因型比例為48.3％(29/60);在非大腸癌的對照組,則分

4、別為6.0％(5/83)、49.4％(41/83)、44.6％(37/83)。兩組組間基因型分布比較差異無顯著性(x2=0.645,P=0.724)。
　　 大腸癌組A、G等位基因頻率分別為30.0％和70.0％,對照組分別為30.7％和69.3％,兩組比較差異無顯著性(x2=0.017,P=0.896)。
　　 2 MMP-9基因-1562(C/T)位點(diǎn)多態(tài)性與大腸癌發(fā)生無相關(guān)性
　　 PCR結(jié)果顯示,在大腸癌

5、組中,CC基因型比例為78.3％(47/60)、CT為21.7％(13/60);在非大腸癌的對照組,則CC為74.7％(62/83)、CT為24.1％(20/83)、TT為1.2％(1/83)。兩組組間基因型分布比較差異無顯著性(x2=0.872,P=0.647)。
　　 大腸癌組C、T等位基因頻率分別為89.2％和10.8％,對照組分別為86.7％和13.3％,兩組比較差異無顯著性(x2=0.380,P=0.538)。

6、　　 3 MMP-9在大腸癌組織中的活性和表達(dá)變化
　　 明膠酶圖分析顯示:同一個(gè)體的腫瘤組織與癌旁正常組織比較,腫瘤組織中的MMP-9活性明顯高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在不同分期的腫瘤組織,Dukes C期MMP-9的活性高于DukesA期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);免疫組織化學(xué)染色也證實(shí),MMP-9在Dukes C期中表達(dá)顯著高于A期,有顯著差異性(P＜0.05)。這些結(jié)果表明,MMP-9

7、的表達(dá)水平升高與大腸癌發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)。
　　 4.COX-2表達(dá)水平與大腸癌進(jìn)展具有正相關(guān)性
　　 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:COX-2在Dukes A、B、C期中表達(dá)量有顯著差異性。B期和C期的COX-2水平顯著高于A期(P＜0.05)。
　　 5.KLF5表達(dá)水平隨大腸癌進(jìn)展而升高
　　 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:在Dukes A、B、C期的大腸癌中KLF5的表達(dá)水平逐漸升高,C期顯著高于A期(P＜