糖尿病患者高密度脂蛋白中血清淀粉樣蛋白A的分布及其抑制粘附分子表達的相關性研究.pdf

1、2型糖尿病病人最大的死亡原因來自于冠脈事件，其冠心病死亡風險與既往發(fā)生過急性心梗的患者相當。在糖尿病患者體內，內皮功能受損促進了早期粥樣斑塊形成。
　　 白細胞向血管壁內的遷移運動是發(fā)生冠脈粥樣硬化早期的重要過程。損傷后的內皮增加了細胞粘附分子的表達，如血管細胞粘附分子(vascular cell adhesionmolecule-1，VCAM-1)、細胞間粘附分子(intracellular adhesion molecule

2、-1，ICAM-1)等，這些粘附分子介導白細胞牢固的粘附在內皮細胞上并最終穿過內皮完成遷移過程，隨著遷移到內皮下的白細胞增多，粘附分子促進了粥樣斑塊的形成。有研究證實無論是分離自人類血漿的HDL還是在體外人工合成的HDL都有抑制內皮細胞表達粘附分子的作用，并且具有濃度及時間依賴性。
　　 本研究旨在比較糖尿病及冠心病患者與正常人HDL對粘附分子抑制功能的影響，并且研究其與HDL中SAA、apoA1含量改變的相關性。
　　

3、 目的：
　　 本實驗的目的在于收集正常人群、糖尿病人群、冠心病人群和糖尿病合并冠心病人群血漿，分離HDL成分，檢測其對粘附分子表達數量及細胞粘附功能的影響，并明確SAA及apoA1含量變化與抑制粘附功能改變的相關性。
　　 方法：
　　 1.收集單純糖尿病患者、糖尿病合并冠心病患者以及單純冠心病患者血漿樣本；
　　 2.通過密度梯度離心分離脂蛋白；
　　 3.用酶聯免疫吸附(ELISA)方法檢測

4、各種脂蛋白的SAA及apoA1的含量；
　　 4.臍靜脈內皮細胞中加入不同患者的HDL，孵育4小時，再加入TNF-α刺激4小時，抗人CD54-PE單克隆抗體標記后流式細胞儀檢測平均熒光強度，從而獲得其ICAM-1表達水平；
　　 5.臍靜脈內皮細胞中加入不同患者的HDL，孵育4小時，再加入TNF-α刺激4小時，抗人CD106-PE單克隆抗體標記后流式細胞儀檢測平均熒光強度，從而獲得其VCAM-1表達水平；
　　

5、6.臍靜脈內皮細胞中加入不同患者的HDL，孵育4小時，再加入TNF-α刺激24小時后加入Calcein-AM熒光染色劑標記的rHP-1細胞，流式細胞儀檢測平均熒光強度，從而獲得其粘附細胞數量；
　　 7.應用SPSSV11.5軟件，采用非參數檢驗和t檢驗分析處理檢測結果，進行相關性分析。
　　 結果：
　　 1.入選患者各組間基礎人口統(tǒng)計學特點、臨床生化指標和既往病史無明顯統(tǒng)計學差異(p>0.05)；
　　

6、 2.HDL中SAA含量在正常人群中較低，在單純糖尿病、單純冠心病及糖尿病合并冠心病患者中較高(p-0.001)；
　　 3.與TNF-α刺激試劑對照組相比，正常人群對照組、糖尿病患者組、冠心病患者組及冠心病合并糖尿病患者組ICAM-1表達水平均明顯下降(P<0.05)。
　　 4.與TNF-α刺激試劑對照組相比，正常人群對照組及各患病組VCAM-1表達水平均明顯下降(P<0.01)。與加入正常人群HDL的對照組相比，

7、糖尿病合并冠心病患者組VCAM-1表達水平明顯下降(p=0.026)；
　　 5.與TNF-α刺激試劑對照組相比，正常人群對照組及單純冠心病患者對照組THP-1平均熒光強度顯著降低(pn=0.012、pc=0.017)。與正常人群對照組相比，單純糖尿病組THP-1平均熒光強度明顯升高(p=0.038)；
　　 6.HDL中apoAl對粘附因子表達數量及THP-1粘附功能沒有明顯影響。
　　 結論：
　　

8、1.正常人群HDL中SAA的含量明顯低于單純糖尿病人群、單純冠心病人群及糖尿病合并冠心病人群；而在糖尿病及冠心病人群中，HDL的SAA含量并無明顯差異；
　　 2.正常人群、單純冠心病患者、單純糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者對ICAM-1表達均有明顯抑制作用；
　　 3.正常人群、單純冠心病患者、單純糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者的HDL對VCAM-1表達均有明顯抑制作用，其中糖尿病合并冠心病患者HDL的抑制作用最強