干貝素對(duì)戊四氮致癇大鼠海馬區(qū)GABA-AR表達(dá)的影響.pdf

1、目的:癲癇(epilepsy,EP)是腦神經(jīng)細(xì)胞異常放電引起的突然性、反復(fù)性和短暫性的腦功能失調(diào),可以表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、意識(shí)、精神等多方面的功能障礙。癲癇發(fā)作不僅使患者痛苦,降低其生活質(zhì)量,對(duì)其家人的生活也造成很大影響。由于中藥的毒副作用比較小,且作用時(shí)間較長(zhǎng),越來(lái)越引起人們的重視。祖國(guó)醫(yī)學(xué)博大精深,中藥具有幾千年歷史,但在治療癲癇的方面還很少有說(shuō)服力的方劑和單藥。中藥干貝素是廣泛存在于海藻和海洋生物的有機(jī)鹽。干貝素又名琥珀酸鈉,而琥珀

2、酸是鎮(zhèn)驚息風(fēng)的經(jīng)典中藥琥珀的有效成分,其化學(xué)結(jié)構(gòu)與腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨酪酸(GABA)和?；撬犷?lèi)似,具有多種藥理效應(yīng),近年一些研究表明,干貝素可降低杏仁核點(diǎn)燃的慢性癲癇模型大鼠的后放電時(shí)程,降低大鼠發(fā)作的Racine's分級(jí),而初步臨床使用中觀(guān)察到一些常規(guī)口服抗癲癇藥物效果不理想的癲癇患者,加服干貝素膠囊療效很好。目前已有報(bào)道稱(chēng)干貝素可增加腦內(nèi)谷氨酸脫羧酶活性,升高腦內(nèi)GABA水平,增強(qiáng)GABA抑制系統(tǒng)功能,降低谷氨酸水平。干貝素是否通過(guò)

3、GABA受體而起抗癲癇作用未見(jiàn)報(bào)導(dǎo),本實(shí)驗(yàn)旨在探討干貝素發(fā)揮其中樞抑制作用的機(jī)制。
　　 我們利用戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)制造癲癇大鼠模型,用不同劑量的干貝素及荷包牡丹堿(bicuculline,Bic)進(jìn)行干預(yù),檢測(cè)海馬組織中GABAA受體亞單位(α1)表達(dá)情況,進(jìn)一步探討干貝素是否直接通過(guò)影響GABAAR而發(fā)揮其中樞抑制作用。
　　 方法:
　　 1分組
　　 采用完全隨機(jī)

4、設(shè)計(jì)。將60只成年雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)抽取8只作為正常組(normal),其余52只用戊四氮制造癲癇模型,篩選造模合格大鼠40只隨機(jī)分為:戊四氮致癇組(PTZ)和致癇后干貝素每次0.8g/kg干預(yù)組(a組)、致癇后干貝素1.2g/kg干預(yù)組(b組)、致癇后干貝素0.8g/kg、荷包牡丹堿干預(yù)組(c組)、致癇后干貝素1.2g/kg、荷包牡丹堿干預(yù)組(d組)。
　　 2造模
　　 正常組腹腔注射生理鹽水,

5、致癇大鼠按45mg/kg腹腔注射PTZ溶液,每次注射間隔24小時(shí),連續(xù)3天,直到大鼠完全點(diǎn)燃(出現(xiàn)RacineⅣ～Ⅴ級(jí)發(fā)作)。
　　 3給藥
　　 各干貝素干預(yù)組于癲癇終止后30分鐘內(nèi)給予干貝素灌胃,a組和c組組給予干貝素0.8g/kgd,灌胃3天。B組和d組給予干貝素1.2g/kgd,灌胃3天。PTZ組和正常組給予生理鹽水灌胃,共灌胃3天,對(duì)b組及d組于第3次灌胃給干貝素30分鐘后側(cè)腦室注射Bic5μl,而a組和c組及

6、正常組于第3次灌胃30分鐘后側(cè)腦室注射生理鹽水5μl。
　　 4腦電圖
　　 將大鼠麻醉后固定于固定架上,采用頭皮針狀電極單極導(dǎo)聯(lián)法,于大鼠左右顳處留置針灸針,待大鼠清醒后制作模型,觀(guān)察癇性放電的頻率及其振幅變化。
　　 5免疫組織化學(xué)染色
　　 麻醉狀態(tài)下經(jīng)左心室行主動(dòng)脈插管,4％多聚甲醛溶液進(jìn)行灌注,取腦固定,常規(guī)包埋,標(biāo)本冠狀位石蠟切片。經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)、山羊血清封閉后,加GABAARα1抗體,再經(jīng)二抗

7、、三抗孵育,DAB顯色后置顯微鏡下觀(guān)察記錄。
　　 結(jié)果:
　　 1癲癇行為學(xué)
　　 造模大鼠均出現(xiàn)不同程度的癇性發(fā)作,出現(xiàn)Ⅳ～Ⅴ級(jí)發(fā)作時(shí)造模成功,灌胃給予干貝素后可使大鼠發(fā)作級(jí)別降低Ⅰ～Ⅱ級(jí)。
　　 2腦電圖
　　 癲癇模型大鼠腦電圖顯示在低幅的9-11Hzα背景節(jié)律下,陣發(fā)性出現(xiàn)高幅多棘波。正常對(duì)照組大鼠腦電無(wú)異常。
　　 3免疫組化法檢測(cè)海馬區(qū)GABAARα1的光密度值結(jié)果
　

8、　 戊四氮模型(PTZ)組與其它各組比較,GABAARα1密度最低都具有顯著性差異(P＜0.05)。干貝素各干預(yù)組之間GABAARα1密度強(qiáng)弱有顯著性差異(P＜0.05),干貝素、荷包牡丹堿干預(yù)組之間密度強(qiáng)弱有顯著性差異(P＜0.05),光鏡下觀(guān)察,免疫組織化學(xué)染色后,空白對(duì)照組GABAARα1陽(yáng)性細(xì)胞在大腦皮質(zhì)各層內(nèi)彌散分布。其它各組與戊四氮模型(PTZ)組相比,大腦皮層及海馬GABAARα1免疫反應(yīng)染色明顯加深,大腦皮質(zhì)錐體細(xì)胞陽(yáng)