LEF1在脫甲基化藥物和紫杉醇聯(lián)合治療腎癌中的作用分析.pdf

1、目的：
　　研究脫甲基化藥物(DAC)與紫杉醇(PTX)聯(lián)合在治療RCC中的協(xié)同作用，并進一步探討LEF1基因在此協(xié)同作用中的作用機制。
　　方法：
　　1、應用MTT法測定作用72 h后的腫瘤細胞生長抑制率，驗證DAC與PTX聯(lián)合治療對ACHN，Caki-1和NC65（均為人腎透明細胞癌）細胞生長的抑制作用，并利用等輻射曲線分析檢驗兩種藥物的協(xié)同作用。
　　2、我們已通過基因芯片技術篩選出兩種藥物相乘相關基因L

2、EF1，本試驗將應用定量PCR進一步驗證二者聯(lián)合應用時LEF1的mRNA表達量變化。兩種腎癌細胞株ACHN，NC65分別用DAC:0.5，1，2，4，8μM；PTX：1，2，4，8，16 nM；DAC（1或2μM）+PTX（1，2，4，8，16 nM）處理3天。Rneasy mini kit(Qiagen)抽提t(yī)RNA，First strand cDNA synthesis kit(Amasham Pharmacia)逆轉錄合成cDNA

3、第一條鏈，Real-time PCR采用SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)進行擴增，IQ5進行熒光定量分析。
　　結果：
　　1、DAC及PTX對腎癌細胞株的生長抑制作用
　　脫甲基化藥物DAC及PTX對三種腎癌細胞株均有生長抑制作用，并且細胞生存率隨藥物濃度的增加而下降，且呈劑量依賴性。
　　2、DAC和PTX的相乘作用
　　當DAC及PTX兩種藥物

4、聯(lián)合應用于腎癌細胞株時，生長抑制率顯著高于PTX或DAC單劑作用效果，應用等輻射曲線分析證實二者聯(lián)合應用可顯著抑制腎癌細胞的生長，具有相乘作用。
　　3、淋巴細胞增強因子-1（LEF1）基因參與了DAC和PTX相乘作用
　　通過定量PCR測定出DAC及PTX兩種藥物聯(lián)合應用時LEF1下降，顯著低于PTX或DAC單劑作用效果，LEF1是兩種藥物聯(lián)合治療腎癌時的相乘相關基因。
　　結論：
　　1、DAC能夠提高RCC