GM-CSF與豬瘟病毒E2基因共表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答.pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種豬的高度接觸性烈性傳染病，死亡率極高，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。我國己將豬瘟列為一類動物疫病。60年代我國研制的豬瘟兔化弱毒疫苗在豬瘟病毒防治中起了決定性作用，有效的控制了豬瘟在我國大規(guī)模的流行。但是近年來，豬瘟在各地仍不斷有散發(fā)和流行。傳統(tǒng)疫苗可能已無法有效地控制該病。因此，發(fā)展安全、有效的新型疫苗控制CSF變得非常的緊迫。佐劑是提高核

2、酸疫苗免疫保護(hù)力的重要途徑。本研究構(gòu)建pcE2與粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)共表達(dá)載體，以探討GM-CSF對核酸疫苗pcE2免疫保護(hù)力的影響。 1、GM-CSF與豬瘟病毒E2基因共表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答：為探討粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)對豬瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫應(yīng)答誘導(dǎo)的影響。將CSFV E2基因和GM-CSF片段插入真核表達(dá)載體pcDNA3.0內(nèi)構(gòu)建pcE2，pcE2-GF及

3、pcGF核酸疫苗。動物試驗(yàn)時(shí)，50只雌性供試小鼠隨機(jī)分為5組，即pcE2(A組)，pcE2-GF(B組)，pcDNA3.0(C組)，pcGF(D組)，生理鹽水(E組)，每組10只。0，2，4周于小鼠左后肢脛前肌進(jìn)行肌注免疫，質(zhì)粒量為每只每次50μg。每次免疫前和末次免疫后2周尾靜脈采血收集血清，ELISA檢測血清內(nèi)特異性IgG水平。末次免疫后1周每組隨機(jī)選3只無菌取脾，MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖情況。結(jié)果表明，與對照組比較，poE2和p

4、cE2-GF3次免疫小鼠，IgG抗體水平逐漸增高，淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率也明顯增高，且pcE2-GF免疫組的IgG抗體水平和淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率均高于pcE2免疫組。 2、GM-CSF與豬瘟病毒E2基因共表達(dá)載體的粘膜免疫：為探討豬瘟核酸疫苗粘膜免疫誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的情況，將50只雌性供試小鼠隨機(jī)分為5組，即pcE2(A組)，pcE2-GF(B組)，pcDNA3.0(C組)，pcGF(D組)，生理鹽水(E組)，每組10只，于0、2、4周，各滴

5、鼻免疫1次，共3次。免疫劑量為每只每次5％司本+1％甘油+50μg DNA質(zhì)粒，免疫的總體積為20μl/只/次，生理鹽水為每只每次20μl。每次免疫前和術(shù)次免疫后2周尾靜脈采血收集血清和小鼠新鮮糞便。ELISA檢測血清內(nèi)特異性IgG、IgA水平和糞便內(nèi)的slgA水平。結(jié)果表明，pcE2免疫組和pcE2-GF免疫組均可誘導(dǎo)全身免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答，加強(qiáng)免疫后的抗體水平逐漸升高，糞樣中的sIgA也有明顯的升高，且pcE2-GF共表達(dá)疫苗免