MitoKATP和A2AR與低氧肺動脈平滑肌細胞增殖關系的研究.pdf

1、目的:研究線粒體ATP敏感性鉀離子通道(MitoKATP)和A2AR與低氧肺動脈平滑肌細胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)增殖關系。
　　 方法:本實驗利用離體培養(yǎng)PASMCs為研究對象。實驗分7組:正常對照組、低氧組(hypoxia，CH)、CH+CGS（A2AR選擇性激動劑）組、CH+DIA（二氮嗪，MitoKATP通道開放劑）組、CH+5-HD（5-羥基癸酸鹽，

2、MitoKATP通道阻滯劑）組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組。CCK-8染色法檢測各組PASMCs增殖情況。利用激光共聚焦顯微鏡羅丹明123(R-123)熒光染色法檢測各組PASMCs線粒體膜電位(△Ψm);實時熒光定量PCR檢測各組PASMCsA2AR、Bcl-2、Bax mRNA表達;Western-Blot法檢測各組PASMCs A2AR蛋白的表達及其線粒體與胞漿內細胞色素C的蛋白含量。
　　 結果:<

3、br>　　 1.各組CCK-8的吸光度(absorbance，A)值，低氧組較對照組升高，CH+CGS組、CH+CGS+5-HD組較低氧組下降（P均＜0.05）。表明低氧情況下，PASMCs增殖，CGS及CGS聯合5-HD均可顯著減少低氧誘導的PASMCs增殖。
　　 2.各組R-123熒光強度，低氧組較對照組增強，CH+CGS組、CH+CGS+5-HD組較低氧組減弱（（P均＜0.05）。表明低氧情況下，PASMCs線粒體膜電

4、位升高，CGS及CGS聯合5-HD可以明顯減輕低氧誘導線粒體膜電位升高。
　　 3.A2AR mRNA表達量，低氧組較對照組升高;A2AR mRNA和蛋白表達量，CH+CGS組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組較低氧組均升高(P均＜0.05)。
　　 4.細胞色素C蛋白表達量:CH+CGS組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組較低氧組胞漿內的含量增加，線粒體內含量減少（P均＜0.05）。

5、r>　　 5.低氧組較對照組，Bax mRNA表達下降，Bcl-2 mRNA表達升高;CH+CGS組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組較低氧組，Bax mRNA表達量升高，Bcl-2 mRNA表達量下降（P均＜0.05）。
　　 結論:上調A2AR表達，可能通過阻斷低氧誘導MitoKATP開放，降低線粒體膜電位，促進肺動脈平滑肌細胞線粒體途徑凋亡，從而抑制肺動脈平滑肌細胞的增殖。提示激活A2AR有望成為研究低氧