層粘連蛋白及Ⅲ型膠原蛋白與LASEK和PRK手術后HAZE的形成關系.pdf

1、[目的]：利用動物實驗，通過免疫學方法定位層粘連蛋白(Laminin，LN)及Ⅲ型膠原蛋白(collagenⅢ，colⅢ)在LASEK和PRK手術前后角膜中的表達分布，并通過統(tǒng)計學方法檢測它們的表達量，從而探討屈光手術后ECM的表達與HAZE的關系。 [方法]：將30只大鼠隨機分為術后1天、2天、1周、2周、4周及正常對照組，共六組。每組5只大鼠(10只眼)。每支大鼠左眼行PRK手術，右眼行LASEK手術。由同一眼科醫(yī)師對大鼠施

2、行雙眼準分子激光手術。分別于術后第1天、第2天、第1周、第2周及第4周用斷髓方法處死后立即摘取眼球?？漆t(yī)人公司鷹式世紀波準分子激光機能量密度為120Mj/cm2，激光頻率10HZ，脈沖能量220mJ，設計矯正度數-2.00D。切削直徑約4.5mm，深度約15um3％戊巴比妥鈉液以1ml/kg腹腔皮下注射以全身麻醉，并予以0.05％愛爾凱因滴眼液點眼局麻后行LASEK和PRK手術。術后兩眼均滴典必殊滴眼液，4次/日，氯霉素滴眼液，6次/日

3、，迪可羅眼膏，睡前1次/日，每周兩種滴眼液各減一滴。所有標本中均無感染征象。摘取標本后用中性甲醛(PH7.4)固定4℃保存24h，，常規(guī)石蠟包埋(標本的長軸與石蠟表面垂直)，制成約5um石蠟切片。 [結果]： 1.HE染色結果顯示：(1)LASEK組：1d上皮瓣細胞層比鄰近區(qū)域增厚，上皮層輕度水腫，上皮層基底細胞比未損傷區(qū)域體積大，膠原排列基本規(guī)則；1w少數上皮基底細胞核深染，較多基底細胞呈空泡樣變性，排列較亂，膠原排列

4、輕微紊亂；4w上皮層明顯增厚達7-8層細胞，且排列紊亂，多數基底細胞排列不規(guī)則，增殖明顯，膠原排列紊亂.(2)PRK組：1d未見或僅有1層上皮細胞覆蓋切削區(qū)，細胞排列輕微紊亂，形態(tài)未見明顯異常，切削區(qū)外上皮層厚度正常，膠原排列基本規(guī)則；1w上皮層增厚到4層或5層，上皮細胞體積開始增大，上皮基底細胞出現(xiàn)空泡樣變性且排列紊亂，基質細胞數開始增多，膠原排列不規(guī)則；4w上皮層繼續(xù)增厚甚至達9層，切削區(qū)比周圍區(qū)域增厚顯著，整個上皮水腫，基底細胞排

5、列不規(guī)則，膠原排列很疏松、紊亂，基質細胞增殖明顯。 2．免疫組化染色法結果：在正常的角膜組織中，LN僅在基底層柱狀上皮細胞胞漿、胞間和角膜基質中微量表達，于前彈力層表達，為標志前彈為層的一條“線”。LASEK術后4小時即可觀察到微弱的LN顯色，且一直持續(xù)到術后四周。對于PRK，從術后第二天至術后四周均可見LN表達，且表達逐漸增強。 正常角膜中不表達colⅢ，LASEK和PRK都于術后第一周開始表達，持續(xù)到術后第四周。但是，LAE