骨髓間充質干細胞移植對心力衰竭大鼠心功能的影響及其機制的探討.pdf

1、目的：通過靜脈注射骨髓間充質干細胞(MSCs)至心力衰竭大鼠體內，觀察MSCs是否向損傷心臟歸巢，探討MSCs對心力衰竭大鼠心功能的影響及其機制。 方法：1、36只12周齡近交系F344大鼠通過腹腔注射阿霉素(2mg/kg，每周一次，連續(xù)6周)建立心衰模型。6周后存活大鼠再隨機分為細胞移植組(n=16)和心衰組(n=16)。另隨機選取10只12周齡F344大鼠作為正常組，腹腔注射等量的生理鹽水。2、從8周齡F344大鼠分離純化M

2、SCs進行體外培養(yǎng)，采用流式細胞儀對體外培養(yǎng)的MSCs的表型CDllb／c、CD34、CD44和CD90進行鑒定。取第三代MSCs進行移植。移植前MSCs用4，6一聯脒一2一苯基吲哚(DAPI)進行標記。 3、末次阿霉素注射后一周，將3×106個MSCs通過股靜脈注射至細胞移植組大鼠。心衰組大鼠注射等量培養(yǎng)基。細胞移植后4周，采用生理記錄儀測量三組大鼠的心功能。4、熒光顯微鏡下觀察移植細胞是否歸巢到心臟；心肌組織切片行免疫熒光化

3、學染色了解移植細胞在受體心臟的分化情況。5、心肌組織切片行Ⅷ因子免疫組化，計算血管密度。6、左室心肌組織切片行天狼猩紅染色，計算膠原容積分數(CVP)。 結果：1、體外培養(yǎng)的第三代MSCs流式細胞儀鑒定結果顯示：CD44陽性細胞數占99．8％±O．9％，CD90陽性細胞數占97．7％±0．4％，而CDllb／c陰性細胞數占84．2％±0．2％，CD34陰性細胞占97．91％±0．7％。2、細胞移植后4周，心功能測定顯示：與正常組

4、相比，心衰組LVSP、LV+dP／dt和LV一dP／dt均明顯下降(P<0．05)，而LVDP明顯升高(P<0．05)；與心衰組相比，細胞移植組大鼠的LVSP、LV+dP／dt和LV-dP／眥均有明顯升高(P<0．05)，而LVDP明顯降低(P<0．05)。3、熒光顯微鏡下觀察，細胞移植組大鼠的心肌切片上有DAPI標記的移植細胞存活，并且表達心肌特異性抗原心肌肌球蛋白重鏈(B-MHC)。4、心肌組織免疫組化顯示：與心衰組相比，細胞移植組