食管鱗癌細胞系RRM1表達水平與細胞對吉西他濱敏感性的相關研究.pdf

1、目的：對化療藥物原發(fā)或繼發(fā)耐藥是導致食管癌化療失敗的主要因素，我們檢測食管鱗癌細胞系對GEM的敏感性，重點探討GEM在細胞內的作用靶點-RRM1表達水平對GEM療效的影響，并進一步探索逆轉耐藥的方法。 材料與方法：我們培養(yǎng)4個食管鱗癌細胞系，包括Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706，采用細胞毒性試驗結合蛋白印跡法和RT-PCR，初步分析各細胞系的RRM1表達水平與細胞對GEM敏感性的關系；使用50 nM

2、GEM持續(xù)培養(yǎng)Kyse-450，監(jiān)測在GEM篩選相對耐藥細胞的過程中的RRM1表達水平的變化；采用RNAi降低RRM1表達水平后檢測細胞對GEM敏感性的改變。統(tǒng)計學分析采用SPSS11.5，組間比較采用χ2檢驗，藥物敏感性交化采用t檢驗。 結果：GEM主要作用于S期，與增加藥物濃度相比，延長GEM的作用時間對凋亡的影響更為顯著(P=0.014)。食管鱗癌細胞對GEM相對敏感，但各細胞系之間對GEM的敏感性相差較大，Eca-109

3、、Kyse-150、Kyse-450和9706在GEM作用48小時的IC50值分別為0.92mM、0.48mM、0.29mM和0.02mM，其中最耐藥(Eca-109)和最敏感的細胞系(9706)之間的IC50相差46倍；而各細胞系之間對DDP的敏感性相差較小(10倍)，細胞對GEM或DDP的敏感性與該細胞的RRM1表達水平呈負相關；使用50nM的GEM持續(xù)培養(yǎng)Kyse-450，流式細胞儀檢測結果顯示隨著GEM培養(yǎng)天數的增加，細胞凋亡比

4、例逐漸增高，第0、3、7、10、13和16天凋亡細胞比例分別為1.57％、1.92％、2.95％、11.60％、16.30％和29.20％，同期存活細胞的RRM1蛋白水平也逐漸增高，第16天達到最高；RRM1 siRNA可以下調Kyse-450的RRM1表達水平，并且能夠顯著增加細胞對GEM的敏感性(P=0.035)，轉染RRM1 siRNA的細胞與母細胞系相比，其對GEM的敏感性增加了4.26倍。 結論：食管鱗癌細胞的RRM1