日本血吸蟲SjIR3基因核酸疫苗的研究.pdf

1、疫苗是防治傳染病的有效手段，作為一種相對便宜且長效的防治措施，研制出血吸蟲病的疫苗一直是科學(xué)家們追求的目標(biāo)。血吸蟲病疫苗的研究經(jīng)歷了從死疫苗、致弱活疫苗、亞單位疫苗到基因工程疫苗的探索過程。核酸疫苗是血吸蟲疫苗研究的重要內(nèi)容。現(xiàn)階段研制的血吸蟲核酸疫苗候選分子所誘導(dǎo)的保護(hù)力比較弱，保護(hù)不完全，因此有必要提高疫苗分子的免疫誘導(dǎo)力和尋找新的疫苗候選分子。 1.該研究是通過由日本血吸蟲cDNA文庫篩選出的新基因(SjIR3)與真核表達(dá)

2、載體pCDNA3.0構(gòu)建出重組質(zhì)粒SjIR3/pC，并以生理鹽水(100μl)、空白質(zhì)粒pCDNA3.0(50μg)為對照免疫KM小鼠(每組18只)，免疫方案是0-2-4-6，每次免疫前及攻擊感染前于尾靜脈采血進(jìn)行ELISA實驗檢測抗體滴度。末次免疫后2w，各組剖殺任意6只小鼠取脾細(xì)胞，分別用ConA或rSjIR3重組蛋白誘導(dǎo)，MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖。各組余下小鼠經(jīng)腹部感染日本血吸蟲尾蚴40±1條，45d后宰殺，觀察實驗組小鼠的減蟲率

3、和減卵率。其結(jié)果顯示，SjIR3/pC可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高抗體水平(0.78±0.05)，ConA或rSjIR3重組蛋白誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果分別為0.57±0.02、0.68+0.01，減蟲率和減卵率分別是29.4％、36.6％。 2.首次構(gòu)建了鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mGM-CSF)與血吸蟲基因的共表達(dá)載體(SjIR3-GMCSF/pC)，并設(shè)計了生理鹽水(100μl)、空白質(zhì)粒pCDNA3.0、SjIR3/pC、mGM

4、-CSF/pC和SjIR3-GMCSF/pC(50μg)五組小鼠實驗，其免疫方案、攻擊感染、檢測方法同前。 結(jié)果顯示，SjIR3/pC組與SjIR3-GMCSF/pC誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的抗體水平分別為0.78±0.04、0.91±0.03；ConA或rSjIR3重組蛋白誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率明顯增加，其A<,570>分別為0.56±0.07和0.68+0.05、0.56±0.07和0.77±0.04；減蟲率和減卵率分別是39.81％、3