懸浮培養(yǎng)不同時(shí)期的紅豆杉細(xì)胞對(duì)誘導(dǎo)子應(yīng)答差異的機(jī)理研究.pdf

1、利用懸浮培養(yǎng)植物細(xì)胞技術(shù)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物是目前最有前景的研究方向之一，而誘導(dǎo)能有效促進(jìn)次生代謝產(chǎn)物合成，并以其便利性、經(jīng)濟(jì)性和高效性得到了廣泛的研究和應(yīng)用。本文以p-ERK和ROS為指標(biāo)，從信號(hào)分子水平探究了誘導(dǎo)子加入時(shí)間與作用效果之間的關(guān)系，為闡明誘導(dǎo)子在不同培養(yǎng)時(shí)期產(chǎn)生不同誘導(dǎo)效應(yīng)的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1.分別應(yīng)用Western免疫印記法和熒光DCFDA法檢測(cè)了紅豆杉細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)周期中胞內(nèi)p-ERK和ROS的表

2、達(dá)情況。結(jié)果表明細(xì)胞培養(yǎng)周期中p-ERK和ROS的活性變化呈“M”形，時(shí)序上p-ERK先于ROS。 2.用1mM Ce4+誘導(dǎo)培養(yǎng)各時(shí)期的紅豆杉細(xì)胞，檢測(cè)誘導(dǎo)后胞內(nèi)p-ERK活性以及ROS含量的變化情況，我們發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)時(shí)期的紅豆杉細(xì)胞對(duì)同樣的誘導(dǎo)能產(chǎn)生不同的應(yīng)答反映。根據(jù)誘導(dǎo)效果的不同，可將細(xì)胞培養(yǎng)分為三個(gè)時(shí)期：培養(yǎng)第1～8d：細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后產(chǎn)生長(zhǎng)效、強(qiáng)烈的p-ERK、ROS表達(dá)；培養(yǎng)第9～15d：細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后產(chǎn)生短效、強(qiáng)烈的p

3、-ERK、ROS表達(dá)；培養(yǎng)第16～25d：細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后產(chǎn)生長(zhǎng)效、較弱的p-ERK、ROS表達(dá)。因此從信號(hào)水平變化特點(diǎn)來看，培養(yǎng)第9～15d的細(xì)胞最適于誘導(dǎo)，尤其以培養(yǎng)第9～11d效果最好。 綜上所述，不同培養(yǎng)時(shí)期紅豆杉細(xì)胞經(jīng)Ce4+誘導(dǎo)后p-ERK和ROS表達(dá)的不同變化特征可能是不同培養(yǎng)時(shí)期誘導(dǎo)子作用效果不同的原因。對(duì)培養(yǎng)第9～11d的紅豆杉細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)能迅速、顯著地提高信號(hào)強(qiáng)度,且短效的信號(hào)有利于細(xì)胞活力的恢復(fù)，可能是這個(gè)時(shí)期