魚酮藤致乳鼠質腦胺黑片多巴經損傷實驗研神元的究.pdf

1、第一部分、中腦黑質器官型腦片培養(yǎng)建立帕金森病模型。 目的：建立體外乳鼠器官型中腦黑質腦片培養(yǎng)模型，為研究帕金森病建立實驗平臺。 方法：取10天齡Wistar乳鼠中腦黑質腦片進行培養(yǎng)，加入低劑量魚藤酮，在倒置顯微鏡下直接觀察黑質腦片的變化情況，測定腦片培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量利用免疫組化染色技術觀察黑質中酪氨酸羥化酶(TH)陽性的多巴胺神經元損傷情況。 結果：倒置顯微鏡下觀察腦片培養(yǎng)20余天內能基本正常生

2、長，大約20余天后腦片活性下降并逐漸死亡；LDH檢測結果顯示腦片穩(wěn)定培養(yǎng)5-7天后LDH釋放水平降低；TH免疫組織化學染色顯示腦片結構清晰，黑質多巴胺神經元顯示清晰，加入低劑量魚藤酮后的實驗組較對照組多巴胺神經元數量較對照組明顯減少。 結論：20余天內腦片基本生長良好，低劑量魚藤酮可以在黑質腦片培養(yǎng)體系中選擇性地導致多巴胺能神經元凋亡，成功在乳鼠器官型中腦黑質腦片上建立了帕金森病模型。 第二部分、魚藤酮致乳鼠黑質腦片多巴

3、胺神經元損傷的實驗研究。 目的：探討低劑量魚藤酮對乳鼠中腦黑質腦片多巴胺能神經元的毒性作用及依達拉奉的保護作用。 方法：取Wistar乳鼠中腦黑質腦片進行培養(yǎng)，試驗組加入不同劑量魚藤酮，對照組中加入自由基清除劑依達拉奉；在倒置顯微鏡下直接觀察腦片黑質部位的變化情況；測定腦片培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量；測定培養(yǎng)液中GSH-Px、SOD、MDA的含量；免疫組化染色技術觀察黑質中酪氨酸羥化酶(TH)陽性的多巴胺神經元損

4、傷情況；western-blot測定腦片中α-突觸核蛋白(α-Synuclein)的含量；電鏡觀察腦片超微病理結構。 結果：腦片經免疫組化染色發(fā)現魚藤酮可以以時間及劑量依賴的方式導致黑質TH陽性神經元的凋亡，α-synuclein表達增高（P<0.05），使用自由基清除劑依達拉奉后與對照組相比，DA神經元凋亡和α-synuclein的生成均有減少。 結論:成功利用中腦腦片器官型培養(yǎng)體系建立了帕金森病模型；低劑量魚藤酮導致