GRIM-19在小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜中表達及其作用的研究.pdf

1、目的:
　　胚胎著床是生命開始的初始環(huán)節(jié)，包括定位、黏附、植入三個步驟，其調(diào)控機制復(fù)雜而精細。GRIM-19(gene associated with retinoid-interferon-inducedmortality-19)為干擾素/維甲酸聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)細胞凋亡相關(guān)基因(GRIMs)家族成員之一，是線粒體復(fù)合物Ⅰ的一部分，在調(diào)節(jié)細胞凋亡和免疫反應(yīng)等方面發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)GRIM-19在早期胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用，但目前其

2、在胚胎著床中的作用未曾有過相關(guān)報道。本課題通過研究GRIM-19在小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜的表達和定位情況，探討GRIM-19在胚胎著床中的作用。在此基礎(chǔ)上，通過體內(nèi)和體外實驗研究GRIM-19在著床過程中對細胞凋亡及免疫反應(yīng)的影響，進一步探討GRIM-19在胚胎著床中的可能作用機制。
　　研究方法:
　　體內(nèi)實驗:收集早期妊娠第1-6天小鼠子宮組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測GRIM-19蛋白在子宮內(nèi)膜上皮細胞中的表達及定位情況;

3、收集早期妊娠、假孕和雌孕激素處理小鼠子宮組織，采用Western blotting和Real-time PCR檢測GRIM-19蛋白和mRNA水平;原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)方法檢測早期妊娠第1-6天小鼠子宮組織細胞凋亡情況。
　　體外實驗:采用pEGFP GRIM-19質(zhì)粒GRIM-19-siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)使RL95-2細胞株過表達或低表達GRIM-19，檢測其對RL95-2-BeWo共培養(yǎng)體外著床模型球狀體粘附率的影響，A

4、nnexinV/PI雙染色法檢測細胞凋亡情況;采用Western blotting和Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染后STAT3、TNF-α及IL-11蛋白和mRNA水平。
　　統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差、中位數(shù)（第一個四分位數(shù)，第三個四分位數(shù)）或數(shù)字表示，組間差異采用獨立樣本資料的U檢驗，t檢驗或卡方檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.GRIM

5、19在小鼠正常妊娠1-6天子宮內(nèi)膜的腔上皮和腺上皮細胞均有表達，
　　且表達具有時間特異性，GRIM-19蛋白和mRNA在妊娠D4天著床窗口期子宮內(nèi)膜中表達水平顯著低于妊娠D0-3及D5-6天，p＜0.05。假孕小鼠D1-6天子宮內(nèi)膜組織中GRIM-19蛋白和mRNA表達量無明顯變化(p＞0.05)。
　　2.孕激素組GRIM19蛋白和mRNA水平較對照組表達無顯著差異(p＞0.05)，但雌激素和雌+孕激素組表達明顯降低(p

6、＜0.05)。
　　3.小鼠正常妊娠D4（著床窗口期）子宮內(nèi)膜組織中細胞凋亡明顯減少。
　　4.pEGFP GRIM-19質(zhì)粒和GRIM-19-siRNA轉(zhuǎn)染RL95-2細胞后，GRIM-19過表達組球狀體粘附率（37.8±2.13）明顯低于對照組（84.2±1.56）及干擾組(79.8±1.72)(p＜0.05)。
　　5.GRIM-19過表達組與對照組和干擾組相比，細胞凋亡明顯增加(p＜0.05)。
　　6.