骨髓增生異常綜合征異常克隆在骨髓細胞中的分布及意義.pdf

1、骨髓增生異常綜合征(MDS)是一組克隆性疾病，其生物學特征是骨髓髓系細胞一系或多系發(fā)育異常(病態(tài)造血)和無效造血，外周血細胞一系或多系減少，最終出現(xiàn)骨髓衰竭或高風險轉化為急性髓性白血病(AML)。WHO分型在綜合MDS多方面的特征，尤其是形態(tài)學和細胞遺傳學特征后，將其分類并歸入髓系腫瘤。其發(fā)病機制是累及多基因多階段的復雜病理過程，正常多克隆造血在多次基因事件后逐步被異常單克隆造血替代。目前對其具體的發(fā)病機制仍未完全闡明。本研究主要通過細

2、胞分類聯(lián)合熒光原位雜交(FISH)技術，觀察MDS異常克隆在骨髓各類細胞中的分布和表現(xiàn)，進一步了解MDS的病理生理過程，揭示其發(fā)病機制，分析其臨床意義，對診斷、治療和預后提供幫助。本研究分為以下三部分： 一、骨髓增生異常綜合征異?？寺≡诠撬杓毎盗兄械姆植?研究MDS異常克隆在骨髓髓系和淋巴系的分布，探討異?？寺》植寂c臨床特征的關系。大多數(shù)研究認為MDS異?？寺±奂八柘担欠裆婕傲馨图毎麆t存在爭議。目前，國內僅見通過免疫

3、磁珠細胞分選(MACS)聯(lián)合FISH檢測MDS異常克隆的分布，我們采用流式細胞分選(FACS)聯(lián)合FISH和細胞形態(tài)學分類聯(lián)合FISH的方法檢測MDS異?？寺〉姆植?。采用FCM分選del(20q)的MDS患者骨髓CD15+(粒細胞)，GPA+(有核紅細胞)，CD3+CD56-CD16-(T細胞)，CD19+(B細胞)，CD3-CD56+CD16+(NK細胞)；細胞形態(tài)學分類del(20q)，8號染色體三體和含有5q-復雜核型的MDS患者

4、紅系、粒系和淋巴系細胞。應用相應的探針，通過FISH檢測異?？寺≡诜诌x細胞中的分布，同時選取4例核型正常者作為對照組。FACS聯(lián)合FISH和形態(tài)學分類聯(lián)合FISH兩種方法檢測del(20q)患者的異?？寺≡诠撬枇Ｏ?CD15+)和紅系(GPA+)中的百分率分別為70.5％/71.2％和93.3％/92.4％，檢測結果非常接近(P＞0.05)。兩種方法檢測異?？寺≡诹馨图毎械陌俜致示鶠殛幮浴?例三體8的患者，異常克隆在骨髓粒系和紅系細胞

5、中的百分率分別為68.1％、72.4％、44.4％和56.4％、57.6％和63.2％，其中1例患者異?？寺≡诹馨图毎械陌俜致蕿?0.6％，高于對照組。含有5q-復雜核型的患者，粒系和紅系中異?？寺“俜致史謩e為49.3％和60.2％，而淋巴細胞中異?？寺“俜致蕿?.85％，低于對照組。實驗中觀察到漿細胞均來自正?？寺?。在此之前，國內尚未見關于漿細胞克隆分布的報道。異常克隆分布在紅系和粒系的患者，外周血細胞水平可表現(xiàn)為正?；蚪档停篐b4

6、8g/L～132g/L，ANC0.38×109/L～2.6×109/L。結論：FACS聯(lián)合FISH的方法和細胞形態(tài)學聯(lián)合FISH的方法檢測MDS異?？寺≡诠撬韪骷毎盗兄械姆植?，兩種方法檢測結果基本一致。MDS異?？寺≈饕植加诠撬枇Ｏ蹬c紅系細胞，個別患者分布于淋巴細胞。但是，異常克隆不表現(xiàn)在漿細胞。進一步研究發(fā)現(xiàn)MDS異?？寺≡诠撬杓毎盗兄械姆植寂c外周血細胞變化無明顯相關性。 二、骨髓增生異常綜合征異?？寺≡诠撬璧蛲黾毎械?/p>

7、分布 MDS的發(fā)生發(fā)展與造血細胞凋亡失控密切相關。大部分研究表明：MDS造血細胞存在過度凋亡。有研究顯示：5q-，+8以及兩條染色體異常的MDS患者異常克隆在凋亡細胞中的比例低于活細胞的比例。探討了del(20q)的MDS異常克隆在骨髓AnnexinV+PI-細胞(凋亡細胞)和AnnexinV-PI-細胞(活細胞)中的分布。通過FCM分選del(20q)的MDS患者骨髓AnnexinV+PI-和AnnexinV-PI-細胞，并檢

8、測有核細胞凋亡率。然后采用LSID20S108探針和TelvysionTM20p探針對分選細胞進行間期雙色FISH檢測；同時選取4例核型正常者作為對照組進行相應檢測。本研究分析的MDSRAEB-1患者，IPSS評為INT-1，骨髓有核細胞凋亡率為16.1％。del(20q)克隆在AnnexinV+PI-細胞和AnnexinV-PI-細胞中的比例分別為32.5％和70.1％。結論：del(20q)的MDS患者骨髓細胞存在凋亡過度，del(

9、20q)的MDS凋亡細胞中大部分是正?？寺〖毎?，一小部分是del(20q)克隆細胞。 三、骨髓增生異常綜合征異?？寺∨c骨髓病態(tài)造血細胞的關系 病態(tài)造血是MDS造血細胞功能異常的表現(xiàn)，與細胞遺傳學異常、細胞凋亡和無效造血的關系研究不多。僅見到Bigoni和Hast等在5q-綜合征、三體8和單體7的患者進行此方面的研究，發(fā)現(xiàn)MDS克隆在5q-綜合征的病態(tài)造血細胞中占大多數(shù)，在三體8和單體7的患者中比例較低。不僅在三體8患者，

10、而且在del(20q)和含有5q-復雜核型的MDS患者，研究MDS異?？寺≡诠撬璨B(tài)和非病態(tài)造血細胞中的分布。在Wright-Giemsa染色的骨髓細胞涂片上進行FISH檢測，直觀統(tǒng)計病態(tài)造血細胞和非病態(tài)造血細胞的熒光標記。結果顯示：MDS病態(tài)造血細胞中來自異?？寺〉募毎?3.3％-95.7％，異常克隆在非病態(tài)造血細胞中占34.5％-91.4％。比較異常克隆在兩類細胞中的比例，除在del(20q)患者的紅系無顯著性差異外(P＞0.1)

11、，異?？寺≡诓B(tài)造血細胞中的比例均明顯高于在非病態(tài)造血細胞中的比例(P＜0.01)。在研究過程中，我們嘗試在非病態(tài)造血細胞中根據(jù)細胞分化成熟程度劃分細胞階段，觀察異?？寺〉姆植肌０l(fā)現(xiàn)異?？寺》植紡脑剂＜毎械谋壤?93.3％)到較成熟桿狀和分葉核粒細胞中的比例(32.5％)；從原始紅細胞中的比例(86.7％)到晚幼紅細胞中的比例(42.3％)，有明顯下降趨勢。異?？寺≡趶碗s核型、2例三體8患者的紅系和粒系以及del(20q)患者的粒系

12、隨著分化成熟有逐漸下降趨勢(P＜0.01)；在1例三體8患者的紅系和粒系以及del(20q)患者的紅系趨勢不顯著(P＞0.1)。觀察MDS病態(tài)造血與凋亡的關系和對外周血細胞的影響。del(20q)的患者，紅系和粒系病態(tài)造血細胞大多數(shù)來自異常克隆，結合FCM結果，凋亡細胞中一小部分為異?？寺?，說明病態(tài)造血與凋亡關系不明顯。del(20q)的患者外周血Hb132g/L,ANC0.38×109/L。三體8患者中2例紅系有病態(tài)造血，1例無病態(tài)造

13、血，外周血血紅蛋白均低于正常；1例粒系無病態(tài)造血，外周血ANC2.6×109/L；2例粒系有病態(tài)造血，ANC分別為0.72×109/L和2.4x109/L。含有5q-的MDS患者，紅系和粒系都病態(tài)造血，外周血血紅蛋白和粒細胞均降低。提示MDS病態(tài)造血對外周血細胞水平影響不大。結論：MDS病態(tài)造血細胞絕大部分來自異?？寺?，是MDS異常克隆在細胞形態(tài)學上的反映，是MDS的特征性表現(xiàn)。MDS異?？寺】梢员憩F(xiàn)為非病態(tài)造血細胞，而且隨著細胞分化成

14、熟，異?？寺〉谋壤饾u降低。細胞遺傳學檢測比病態(tài)造血更具有早期診斷價值，大部分MDS病態(tài)造血與無效造血關系不明顯，也不能反映凋亡狀態(tài)。 綜上所述，本研究應用細胞形態(tài)學分類和FACS聯(lián)合FISH技術檢測MDS異常克隆在骨髓各類細胞中的分布和表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)異常克隆主要分布于髓系和病態(tài)造血細胞，一小部分分布在凋亡細胞。進一步結合MDS患者的臨床資料分析顯示，MDS病態(tài)造血是MDS的特征性表現(xiàn)，是MDS異?？寺≡诩毎螒B(tài)學上的反映。異?？寺?/p>