大腸癌輻射敏感相關(guān)基因與蛋白初步篩選.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簯?yīng)用基因芯片技術(shù)和蛋白組學(xué)技術(shù)初步篩選人大腸癌細(xì)胞輻射敏感相關(guān)基因與蛋白。 實(shí)驗(yàn)方法：1)、基因組部分：培養(yǎng)2種不同輻射敏感性的人大腸癌細(xì)胞LOVO和SW480，收集細(xì)胞至少達(dá)到107數(shù)量級(jí)，提取細(xì)胞總RNA，采用人全基因組表達(dá)譜芯片獲得兩株細(xì)胞的基因表達(dá)譜，分析比較兩者之間基因的差異表達(dá)情況。2)、蛋白組部分：同法培養(yǎng)LOVO細(xì)胞和SW480細(xì)胞，分別予以O(shè)、2、4、6GyX線照射，運(yùn)用SELDI-TOF蛋白質(zhì)芯片技

2、術(shù)測(cè)定照射后24小時(shí)細(xì)胞的蛋白質(zhì)譜，分析兩株細(xì)胞間不同照射劑量后的蛋白質(zhì)表達(dá)情況，通過(guò)Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)搜索比較兩者之間的差異表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： l、LOVO細(xì)胞組檢出基因16882個(gè)，SW480細(xì)胞組檢出基因17114個(gè)。 2、在2倍以上差異表達(dá)基因中篩選出上調(diào)基因908個(gè)，下調(diào)基因1312個(gè)。上調(diào)基因中包括Fas基因、NFkB基因等，下調(diào)基因中包括Caspas6基因、RAD21基因等已有研究證明與輻射

3、敏感相關(guān)。 3、LOVO細(xì)胞中高表達(dá)的基因主要有CEACAM5、THBSl、SERPINE2、ARL7、HPGD，提示與輻射敏感相關(guān)；SW480細(xì)胞中高表達(dá)的基因主要有SCD、NQ01、LYZ、KRT20、ATPlBl，提示與輻射抵抗有關(guān)。 4、兩種細(xì)胞間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)峰共5組，平均質(zhì)荷比(m／z)分別為3366．87，4743．52，6077．43，7259．53，9155．45。 5、LOVO細(xì)胞隨輻射劑量

4、增加有梯度變化的蛋白質(zhì)峰有5組，其平均質(zhì)荷比(m／z)分別為2478．24，4521．30，5383．82，8454．03，11610．70：SW480細(xì)胞隨輻射劑量增加有梯度變化的蛋白質(zhì)峰有4組，其平均質(zhì)荷比(m／z)分別為5655．29，7472．21，15829．02，17859．47。 6、根據(jù)平均質(zhì)荷比，通過(guò)Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)搜索初步篩選出與腫瘤輻射敏感性高度相關(guān)的主要蛋白GADD45B，Thioredoxin

5、，MetallothioneinlfMTl)。 7、Thioredoxin在基因表達(dá)譜中是下調(diào)基因，Metallothionein1(MTl)在基因表達(dá)譜中是上調(diào)基因,GADD45B在基因表達(dá)譜中屬于無(wú)變化基因。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： l、大腸癌輻射敏感性的預(yù)測(cè)可以從基因水平和蛋白質(zhì)水平來(lái)體現(xiàn)。 2、表達(dá)譜基因芯片技術(shù)能快速、靈敏地預(yù)測(cè)大腸癌輻射敏感性，篩選大腸癌輻射敏感性相關(guān)基因。 3、Thioredox