TLX基因對大鼠真皮多能干細胞增殖和成神經細胞分化及移植治療脊髓損傷的影響研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文TLX基因對大鼠真皮多能干細胞增殖和成神經細胞分化及移植治療脊髓損傷的影響研究姓名：王濤申請學位級別：博士專業(yè)：神經病學指導教師：李露斯20080501第三軍醫(yī)大學博士學位論文分化為神經細胞，可能為SCI再生修復提供更合適的種子細胞。主要結果如下：1、利用設計合成的TLx簡并引物，以成年大鼠大腦組織總RNA為模板，進行RTPCR，我們首次成功擴增出大鼠TLX全長編碼序列，序列在線BLAST發(fā)現(xiàn)，其與大鼠預測的TL

2、X序列99％相似，證實擴增和克隆成功，將大鼠TLX序列登陸GeneBank，獲得Geneaccessionnumber：EU316216。2、利用RT_PCR的產物，采用定向克隆的方法，先進行T／A克隆，然后成功地將TLXcDNA全長序列亞克隆到pEGFPNl真核表達載體上。在此基礎上，將重組質粒pEGFPNl一TLX轉染到DMSCs中，用熒光顯微鏡下觀察到熒光蛋白的表達和用ImPCR方法檢測到TLxmRNA的表達，說明TLx已成功轉染

3、DMSCs并能在DMSCs中表達。3、MTT法研究顯示TLX可以促進DMSCs的增殖；DMSCs經誘導后可分化成神經細胞，分化出來的細胞中，星形膠質細胞的比例較高，而神經元比例較低。TLx可以促進DMSCs向神經元方向分化，TLX／DMSCs分化出來的細胞中，與未轉染TLx的DMSCs相比，神經元的比例明顯增高，而星形膠質細胞比例降低。4、將DMSCs和TLx基因修飾DMSCs移植入大鼠脊髓全橫斷處，結果顯示DMSCs和TLX基因修飾D

4、MSCs都能在宿主脊髓內存活和整合，并使脊髓形態(tài)學結構達到部分恢復；行為學檢測檢測顯示大鼠脊髓運動功能得到部分恢復，其中移植TLX基因修飾DMScs使大鼠的功能恢復更好一些。綜上所述，我們首次成功的地擴增出大鼠TLx基因并構建了含TLX基因全長編碼序列的真核表達載體。進一步研究顯示TLX基因可以促進DMSCs增殖和向神經元方向分化，抑制DMSCs向星形膠質細胞的分化；移植TLX基因修飾DMsCs可以促進大鼠脊髓損傷后功能和形態(tài)的部分恢復