環(huán)境應答基因JWA對谷氨酸轉運的影響.pdf

1、該研究旨在探討JWA蛋白與谷氨酸轉運的關系及其可能的機制,并進一步研究JWA參與調節(jié)環(huán)境污染物農(nóng)藥氰戊菊酯對細胞內氨基酸轉運的影響.為研究JWA基因對谷氨酸轉運的影響,用pCMV<,2>-flag-JWA載體轉染的HEK293細胞,建立JWA高表達模型;用反義寡核苷酸技術抑制細胞內JWA表達,建立JWA低表達模型;用激光共聚焦顯微鏡檢測細胞內Ca<'2+>的含量,用免疫熒光和Western blot法檢測細胞內JWA蛋白的分布和表達水平

2、.摻入[<'3>H]-D,L-谷氨酸為標志物觀察JWA基因對細胞攝取谷氨酸的影響.根據(jù)JWA基因編碼氨基酸的磷酸化位點的位置,分別構建了四個含不同長短JWA編碼區(qū)多肽片段的pEGFP表達載體,轉染HEK293細胞后,在活細胞觀察佛波酯(PMA)對JWA表達和細胞內定位的影響.用不同濃度結果表明:JWA基因高表達的細胞攝取谷氨酸增加,用反義寡核苷酸關閉JWA后,谷氨酸攝取下降.PMA可增加細胞谷氨酸轉運,轉染JWA對PMA引起的細胞谷氨酸

3、攝取無顯著影響.PMA還引起HEK293細胞內游離鈣濃度一過性升高.PMA使轉染pEGFP-JWA的HEK293細胞內JWA表達升高,細胞內定位發(fā)生改變.用不同濃度的氰戊菊酯處理PC12細胞后發(fā)現(xiàn)可誘導JWA基因表達升高,并在一定濃度時促進細胞的谷氨酸攝取,提示該基因可能在細胞應答環(huán)境污染物對神經(jīng)遞質的影響中發(fā)揮作用.JWA蛋白通過非PKC途徑增強HEK293細胞谷氨酸轉運功能,增強谷氨酸介導的神經(jīng)興奮傳遞,參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變,因而可