抑癌基因fez、lrig1在食管癌中的表達及意義.pdf

1、背景與目的 食管癌(esophageal carcinoma)是人類常見的惡性腫瘤之一。全世界每年約30萬死于食管癌，其中50﹪在我國，每年因食管癌死亡的人數(shù)約占我國全部惡性腫瘤死亡總數(shù)的1/4，嚴重危害人類健康。食管癌按病理學類型主要分為鱗狀細胞癌和腺癌。在中國主要以鱗狀細胞癌為主。食管癌的病因尚不十分清楚，一般認為與強致癌物的存在、食管損傷、食管疾病以及食物的刺激作用、營養(yǎng)不良和微量元素缺乏及遺傳因素等多方面因素有關。與其他

2、惡性腫瘤的生物學特性一樣，食管癌同樣具有侵襲與轉移的特征。而且，由于食管癌的早期臨床癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時已屬中晚期，使得早期診斷率很低，治愈率大大降低，預后差。因此，對食管癌的早期診斷及侵襲與轉移機制發(fā)面的研究非常重要，其意義在于可以通過提前發(fā)現(xiàn)并阻止腫瘤的侵襲與轉移，配合手術、放療、化療等手段對腫瘤進行綜合治療，從而提高食管癌的治愈率，改善患者的預后。 隨著細胞分子腫瘤學的發(fā)展，現(xiàn)已證實：食管癌的發(fā)生發(fā)展是多因素共同作用于食管

3、癌相關基因及調控因子，引起相關基因結構及表達水平改變，最終導致食管癌的發(fā)生。目前普遍認為，癌基因的激活和抑癌基因的失活是細胞癌變的分子基礎。癌基因的激活和抑癌基因的失活的相互作用，尤其是抑癌基因的失活越來越引起人們的重視。癌基因由原癌基因激活而來，存在于正常細胞的癌基因稱為原癌基因，是細胞基因組的正常成分，只有經某些因素作用后，原癌基因的結構改變和激活成為癌基因，才具有致癌活性；抑癌基因從概念上來說，凡是產生直接或間接抑制細胞增殖、癌變

4、的腫瘤抑制基因，都可稱為抑癌基因。通常認為癌基因和抑癌基因是一對矛盾的統(tǒng)一體，互相制約，形成一種平衡，控制著細胞的生長和分化，細胞分化異常導致上皮細胞發(fā)生惡性轉化是食管鱗癌發(fā)生的重要機制之一。由于機體經常受到外界環(huán)境中有害因素的侵害，為防止細胞的癌變發(fā)生，需要抑癌基因處于一定程度的表達，通常是低水平表達。當物理化學因素導致DNA損傷，而修復基因修復失敗，導致基因突變，或者病毒致癌因素整合到DNA中，導致基因突變，從而導致原癌基因激活，或

5、抑癌基因失活，產生突變細胞；若免疫監(jiān)視失敗，形成單克隆或多克隆增殖，進而浸潤或轉移，最終形成腫瘤。抑癌基因是通過純合缺失或失活而引起惡性轉化的基因，其在控制細胞生長、增殖及分化過程中起著十分重要的負調節(jié)作用，并能潛在抑制腫瘤生長。反之，則可導致細胞惡性轉化而發(fā)生腫瘤。有實驗表明，正常細胞與癌細胞在體外培養(yǎng)條件下融合后，其雜交細胞的致癌性降低或消失。其機制是正常細胞中含有癌變的基因，即抑癌基因，也稱腫瘤抑制基因。在細胞癌變過程中，不僅僅是

6、由于原癌基因的激活，而且涉及抑癌基因的失活。 當前多方面資料表明，fez(亮氨酸拉鏈腫瘤抑制基因leuaine zipper tumorsuppressor，fez/lztsl，下簡稱fez)、lrigl(亮氨酸重復序列和免疫球蛋白樣結構域，1eucine rich repeats and immunoglobtIlin like domains，下簡稱lrigl)基因是抑癌基因，迄今為止，在人類多種腫瘤中均可檢測到fez、lr

7、igl基因的異常表達。我國是食管癌高發(fā)地區(qū)，對食管癌組織．fez、lrigl基因的研究，迄今為止，尚未見報道。鑒于此，我們應用逆轉錄多聚酶鏈反應技術(reversetrancriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)分析法檢測．fez mRNA、lriglmRNA在食管癌標本各組織中(癌組織、癌組織及遠癌粘膜組織)的表達情況，為食管癌的早期診斷、預后評估及基因診治探索可行的途徑。 材料和

8、方法 (1)河南省腫瘤醫(yī)院胸外科2006-03/2006-08月行手術切除的食管癌住院患者36(男26,女10)例，年齡62.17±7.2歲(40～75歲)：術前均未接受化、放療，腫瘤組織經病理學檢查證實均為鱗狀上皮細胞癌；標本均在手術中收集，取材后速凍于液氮中，后于-80℃超低溫冰箱中貯存?zhèn)溆?。標本取材大小均約0.5cm×0.5cm×0.2cm；癌組織均在原發(fā)灶取材，避開壞死、炎癥區(qū)域；癌旁組織取自相應腫塊旁2cm的食管黏膜組

9、織；遠癌組織均取自距腫塊邊緣5cm以上的食管黏膜組織。 (2)提取組織中總RNA，用RT-PCR方法擴增目的基因．fez、lrigl。同時擴增GAPDH基因做為內參照基因對fez,lrigl做半定量分析，檢測fezmRNh、lriglmRNh分別在癌組織、癌旁組織及遠癌黏膜組織中的表達情況。 (3)fez mRNA、lriglmRNA的表達水平以均數(shù)±標準差表示，統(tǒng)計工具采用SPSS13．0統(tǒng)計分析軟件。根據(jù)資料類型

10、采用t檢驗、ANOVA、X<'2>檢驗及Fisher'sExact Test。取P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果 36例食管遠癌黏膜組織中均有fez mRNA、lrigl mRNA陽性表達，癌旁組織中有33例(91．7﹪)．fez mRNA陽性表達，33例(91．7﹪)lrigl mRNA陽性表達；而食管癌組織中fez mRNA、lrigl mRNA陽性表達數(shù)分別為14例(38．9﹪)和15(41．7﹪)例：表達

11、缺失分別為22例和21例。經統(tǒng)計學分析，fezmRNA、lrigl mRNA在食管癌癌組織的陽性表達水平低于在癌旁組織和在遠癌組織中的表達；且在癌旁組織中二基因mRNA的表達也低于在遠癌組織中的表達；隨著分化程度的增強(低分化→高分化)二基因mRNA的陽性表達率逐漸增加；統(tǒng)計學結果顯示低分化、中分化組與高分化組有明顯的統(tǒng)計學差異，而中分化、高分化組比較無顯著性差異；但二基因mRNA的表達與有、無淋巴結轉移、食管癌浸潤深度、患者的年齡、性