人骨形態(tài)發(fā)生蛋白4成熟肽DNA序列的克隆與表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、BMP-4(bone morphogenetic protein 4)是轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族成員之一,具有促進(jìn)軟骨和骨組織形成的作用,在治療骨折和骨缺損等方面具有極大的臨床應(yīng)用價值.因此該研究利用基因工程生產(chǎn)人BMP-4成熟肽.采用細(xì)胞裂解液法自毛發(fā)提取基因組DNA,通過PCR法擴(kuò)增出編碼人骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP-4)成熟肽的DNA序列,克隆到載體pUCm-T中.在此基礎(chǔ)上,將編碼人骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP-4)成熟肽的

2、基因片段分別克隆到pBV220、pGEX-3X和pET42a載體上進(jìn)行原核表達(dá),并且克隆到pIC9酵母分泌型表達(dá)載體上,為BMP-4的真核表達(dá)奠定基礎(chǔ).該實驗結(jié)果顯示:1、自發(fā)根可以提取出滿足PCR需要的DNA;2、國人bmp-4基因中編碼hBMP-4成熟肽的DNA序列,與白種人的序列無差別;3、利用原核非融合表達(dá)系統(tǒng)成功的表達(dá)了重組hBMP-4成熟肽,復(fù)性后的重組蛋白有良好的生物活性;4、利用原核融合表達(dá)系統(tǒng)成功的表達(dá)了重組hBMP-

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