Ki67反義核酸載體對乳腺癌細胞的抑制效應及相關機制的研究.pdf

1、第一部分：乳腺癌細胞Ki67表達與其增殖、侵襲能力相關性的研究 目的：研究細胞增殖抗原Ki67在不同乳腺癌細胞株中的表達，探討其與乳腺癌細胞惡性表型的關系。方法：采用半定量RT-PCR和Westernblot分別檢測3株乳腺癌細胞中Ki67mRNA和蛋白表達水平。MTT檢測乳腺癌細胞株的增值能力。Transwell檢測乳腺癌細胞株的遷移及侵襲能力。結果：3株乳腺癌細胞Ki67轉錄和翻譯水平呈同步變化(P＜0.05)，均為MDA-

2、MB-435s最高，MDA-MB-231稍低，MCF-7最低。增殖、侵襲能力亦為MDA-MB-435s最強，MDA-MB-231次之，MCF-7最弱。結論：3株乳腺癌細胞Ki67mRNA和蛋白水平與細胞增殖、侵襲能力呈正相關，提示Ki67在乳腺癌發(fā)生演進中可能作為獨立因素起重要作用，有望成為治療的新靶點。 第二部分：Ki67反義核酸對乳腺癌細胞增殖、侵襲能力的抑制及相關機制的研究 目的構建增殖核相關抗原(Ki67)反義核

3、酸載體，并研究阻斷Ki67基因的表達對MDA-MB-435s細胞生物學行為的抑制效應。方法用基因重組方法將人Ki67基因cDNA保守序列反向克隆到真核表達質粒pEGFP-C1中，構建人反義Ki67核酸載體。然后通過脂轉法瞬時轉染MDA-MB-435s細胞系，用RT-PCR和Westernblot檢測轉染前后Ki67mRNA和蛋白的表達；MTT、Boyden分別檢測增殖及侵襲能力變化；流式細胞儀檢測凋亡率改變。結果轉染Ki67反義核酸載體

4、組的MDA-MB-435s細胞Ki67mRNA和蛋白表達明顯低于對照組，分別下調48％、72％；且細胞增殖受抑制，體外侵襲能力也明顯降低；流式結果凋亡率達26.16±0.06％；與對照組相比差異均有顯著性意義(P＜0.05)。結論阻斷Ki67的表達可顯著抑制乳腺癌細胞系MDA-MB-435s的增殖、侵襲能力，并促進其凋亡。提示Ki67可以作為乳腺癌治療的新靶點。 第三部分：乳腺癌細胞增殖活性與淋巴結轉移的關系 目的：探討

5、細胞增殖抗原標記物Ki67在乳腺導管癌中的表達及與淋巴結轉移等臨床指標的相關性。方法：采用免疫組化方法，檢測60例乳腺導管癌及鄰近正常組織中Ki67表達，并將表達結果與淋巴結轉移情況及臨床病理特征進行統(tǒng)計學分析。結果：60例乳腺導管癌中有51例Ki67表達(85％)，而癌旁及正常乳腺組織散在性弱表達或無表達。Ki67在淋巴結轉移組表達評分中位數(shù)為3.9，而在非淋巴結轉移組評分中位數(shù)為2.0，差異有顯著性(P＜0.05)。淋巴結轉移至Le