脂肪酸合成酶（FASE）及其抑制劑在胃腺癌中的作用.pdf

1、前言:脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase，F(xiàn)ASE)是脂肪酸生物合成過程中將小分子碳單位聚合成長鏈內源性脂肪酸的關鍵酶。在正常情況下僅表達于肝臟、脂肪組織和泌乳期乳腺等組織中，但大量的研究發(fā)現(xiàn)在許多腫瘤組織和細胞中如乳腺癌、前列腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、卵巢癌等都存在脂肪酸合成酶(FASE)的過度表達，且FASE的過度表達與腫瘤的轉移、侵襲以及診斷和預后密切相關。同時研究發(fā)現(xiàn)：脂肪酸合成酶抑制劑淺藍菌素(Cerulenin

2、)可以特異性的抑制FASE的活性，不可逆抑制內源性脂肪酸的合成，從而抑制腫瘤細胞的增殖，并誘導腫瘤細胞凋亡的發(fā)生。目前關于脂肪酸合成酶及其抑制劑在消化道腫瘤方面的研究較少，因此本課題主要旨在FASE在胃癌組織和細胞中表達情況以及FASE抑制劑Cerulenin對于胃癌細胞的細胞毒性等諸多方面開展了如下四個部分的研究： 第一部分:三種胃腺癌細胞系中脂肪酸合成酶的表達及其意義 目的：研究三種不同分化的胃癌細胞中脂肪酸合成酶(

3、FASE)的表達情況及其可能的臨床意義。 方法：用RT-PCR和Westernblot技術檢測三種不同分化程度的人胃腺癌細胞系(MKN45、SGC7901和MKN28)中FASE的mRNA和蛋白的表達水平，并分析其與三種不同分化胃癌細胞的關系。 結果：三種不同分化程度的人胃腺癌細胞系MKN45、SGC7901和MKN28均可見FASE的mRNA和蛋白的表達；相對于低分化MKN45，以高、中分化的MKN28和SGC7901

4、表達量較高(p＜0.05)。 結論：FASE高表達于胃癌細胞中，尤其主要發(fā)生在胃癌的早期階段，與胃癌的分化程度密切相關。 第二部分:胃腺癌組織中FASE和相關蛋白的表達及其意義 目的：檢測胃癌中脂肪酸合成酶(FASE)和E-鈣黏素(E-cadherin)的表達，并探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：采用免疫組織化學S-P技術，對胃癌及癌旁正常組織各121例手術標本中FASE、E-鈣黏素的表達進行檢測，并

5、分析兩種蛋白與臨床病理特征之間的關系。 結果：FASE在癌旁組織中的陽性表達率(11.3％)明顯低于胃癌組織(72.6％，P＜0.01)，而E-鈣黏素在癌旁組織的陽性表達率(93.6％)則明顯高于胃癌組織(43.3％，P＜0.01)。FASE表達與患者年齡、性別、Lauren's分類和分化程度相關(P＜0.05)，與腫瘤大小、Borrmann's分類、侵襲深度、轉移情況、TNM分期及生長方式無關(P＞0.05)；FASE陽性和陰

6、性患者的生存率雖有不同但無顯著性差異(P=0.349)。E-鈣黏素表達與轉移情況、分化程度、Lauren's分類相關(P＜0.05)；與性別、年齡、腫瘤大小、Borrmann's分類、侵襲深度及TNM分期等均無關(P＞0.05)。胃癌組織中E-鈣黏素表達缺失與FASE高表達呈正相關(P＜0.05)。 結論：FASE高表達與E-鈣黏素表達缺失均與胃癌分化程度相關，兩者聯(lián)合檢測有可能作為評估胃癌惡性程度的生物學指標，為臨床診斷及治療

7、該病提供重要依據(jù)。 第三部分:脂肪酸合成酶抑制劑抑制人胃癌細胞增殖并誘導凋亡 目的：研究脂肪酸合成酶(FASE)抑制劑淺藍菌素(cerulenin)對人胃癌細胞株增殖的影響及誘導凋亡的作用。 方法：MTF法觀察終濃度2.5，5，10，20和40mg/Lcerulenin分別作用于無血清培養(yǎng)及有血清培養(yǎng)的MKN28，SGC7901和MKN45細胞株24h后，檢測其對細胞增殖的抑制作用。40mg/Lcerulenin

8、作用于無血清培養(yǎng)的三種細胞12h后，用流式細胞儀(FCM)、DNA凝膠電泳對其凋亡和細胞周期進行檢測。 結果：Cerulenin對人MKN28，SGC7901，MKN45細胞株的增殖有顯著的抑制作用并呈劑量依賴性，對無血清組的培養(yǎng)細胞株的抑制作用高于有血清組。 結論：Cerulenin顯著地阻遏人胃癌細胞的增殖并誘導人胃癌細胞凋亡，有可能成為胃癌治療的新靶點。 第四部分:線粒體凋亡通路在FASE抑制劑誘導胃癌細胞

9、凋亡中的作用 目的：研究Caspase-3和Caspase-9在FASE抑制劑Cerulenin誘導的胃癌細胞凋亡過程中的作用，與內源性線粒體凋亡通路的關系。 方法：以40mg/Lcerulenin分別作用于加caspase-3抑制劑、caspase-9抑制劑、聯(lián)合Caspase-3和Caspase-9抑制劑以及未加caspases抑制劑培養(yǎng)的MKN45細胞，培養(yǎng)24小時后，用流式細胞儀分別檢測細胞凋亡率。 結果

10、：相對于對照組(凋亡率為3.05％)，Cerulenin組可以顯著誘導MKN45細胞的凋亡(凋亡率為35.39％，P＜0.01)；而Caspase-3抑制劑和Caspase-9抑制劑均可明顯抑制cerulenin誘導MKN45細胞的凋亡，凋亡率分別為22.16％、29.36％。特別是在聯(lián)合應用Caspase-3和Caspase-9抑制劑后，可極大地抑制cerulenin誘導的細胞凋亡(凋亡率為13.69％，P＜0.05)。 結論