survivin基因表達與脈絡膜惡性黑色素瘤增殖及凋亡的相關性研究.pdf

1、脈絡膜黑色素瘤(choroidalmelanoma)起源于脈絡膜黑色素細胞，為成人常見的眼內(nèi)惡性腫瘤，預后不良，嚴重地摧殘人們的視功能，并威脅著人們的生命安全。深入地研究該病的病因及發(fā)病機制，尋求可靠的評估轉(zhuǎn)移及預后的指標，對臨床診療具有重要意義。腫瘤分子生物學研究揭示細胞增殖和凋亡失衡是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。近年來，對細胞凋亡抑制的研究已成為分子腫瘤學的一個熱點。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，其在細胞周期的G2/M

2、期表達，可抑制半胱氨酸蛋白酶(caspase3、7)的活性而發(fā)揮抗凋亡功能，也可以調(diào)控細胞周期，參與血管形成，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預后密切相關。目前survivin在脈絡膜黑色素瘤中表達及其與細胞增殖和凋亡的研究國內(nèi)外均未見研究報道。因此，研究survivin在脈絡膜正常組織及黑色素瘤中的表達，及其與腫瘤細胞增殖、凋亡的相關性，對闡明survivin在脈絡膜黑色素瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，為判斷預后并可能在診斷和治療上的應用都有著重要的意

3、義。 目的本課題通過對凋亡蛋白抑制因子survivin在脈絡膜黑色素瘤不同病理特征中的表達及其與細胞增殖和凋亡的關系進行研究，初步探討其在脈絡膜黑色素瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，深入了解脈絡膜黑色素瘤的生物學行為，并為脈絡膜黑色素瘤的早期診斷，判斷預后和指導臨床治療提供理論和實驗依據(jù)。 材料和方法1.選擇51例脈絡膜黑色素瘤標本，術前均未行放療、化療及其它治療，全部組織經(jīng)10％福爾馬林固定，石蠟包埋。所有標本重新進行HE染色，確

4、定組織病理學類型。其中梭形細胞型13例，上皮細胞型16例，混合細胞型22例；其中侵犯鞏膜者17例，未侵犯鞏膜者34例；腫瘤最大基底直徑(largesttumordiameter，LTD)≥15mm者16例，LTD＜15mm者35例；局限于脈絡膜者36例，累及睫狀體者15例。另取10例尸檢眼正常脈絡膜組織標本作為對照。 2.采用免疫組化鏈霉卵白素生物素復合物(SP)方法檢測survivin和增殖細胞核抗原(PCNA)蛋白的表達，分

5、別計算survivin免疫反應評分(IRS)和增殖指數(shù)(PI)；采用TUNEL方法原位檢測脈絡膜黑色素瘤凋亡細胞，計算凋亡指數(shù)(AI)。 3.數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.5軟件包完成，survivin的表達與臨床病理特征間的比較采用χ2檢驗、Fisher’s精確概率檢驗、方差分析，survivin表達陽性、陰性組間，凋亡指數(shù)、增殖指數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗；survivin表達評分與AI、PI的關系采用一元線性相關分析，取α=0

6、.05為顯著性檢驗水準。 結(jié)果1.survivin在脈絡膜黑色素瘤及正常脈絡膜組織中的表達51例脈絡膜黑色素瘤組34例survivin蛋白陽性表達(66.67％)，survivin表達主要定位于脈絡膜黑色素瘤細胞胞漿中，為粗細不一的棕黃色顆粒；10例正常脈絡膜組織中均未見survivin蛋白陽性染色。兩者有非常顯著性差異(P＜0.01)。 2脈絡膜黑色素瘤中survivin的表達及與臨床病理特征的關系鞏膜受侵組survi

7、vin表達陽性率明顯高于鞏膜未受侵組，兩者進行χ2檢驗，差異有非常顯著意義(P＜0.05)。survivin表達陽性率在梭形細胞腫瘤、混合型腫瘤及上皮樣細胞型腫瘤分別為46.2％、59.1％、93.8％，三者進行χ2檢驗，差異有顯著意義(P＜0.05)。進一步在梭形細胞型、上皮樣細胞型及混合型腫瘤之間作兩兩比較，混合型及梭形細胞型survivin的表達差異無顯著性(P=0.38)，但上皮樣細胞型survivin的表達均顯著高于前兩者(P

8、＜0.05)。survivin在LTD≥15mm組的表達陽性率為79.2％，高于LTD＜15mm組(55.6％)，腫瘤位置在累及睫狀體組survivin陽性表達率為80.0％，高于單純位于脈絡膜組(61.1％)，但經(jīng)χ2檢驗，survivin表達與腫瘤最大基底直徑及腫瘤位置之間差異均無顯著性(P＞0.05)。 3.凋亡指數(shù)(AI)的測定以及與survivin表達的關系脈絡膜黑色素瘤無論分化高低均可見標記的凋亡細胞，陽性細胞為細胞

9、核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。AI范圍是0.61％～17.74％，平均(7.65±4.41)％。在survivin表達陽性的標本中AI值為6.22±3.67，顯著低于survivin表達陰性標本中的AI值(10.51±4.46)，二者差異有顯著性(t=3.665，P＜0.05)，經(jīng)直線相關分析，AI值與survivinIRS呈顯著負相關(r=-0.652，P＜0.05) 4.增殖指數(shù)(PI)的測定以及與survivin表達的關系本組脈絡膜

10、黑色素瘤標本均有PCNA陽性表達，PCNA陽性染色細胞胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒，PI范圍是3.57％～62.18％，平均(36.93±13.02)％。survivin陽性組和陰性組PI分別為(40.4±12.5)％和(29.9±11.4)％，survivin陽性組PI明顯高于陰性組PI(t=2.904，P＜0.05)，且差異具顯著性。PI值與survivinIRS呈顯著正相關(r=0.659，P＜0.05)。 結(jié)論1.survivi

11、n在脈絡膜黑色素瘤組織中呈高表達，在正常脈絡膜組織中未見表達，是一個較為特異的腫瘤標志物，提示survivin可能與脈絡膜黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展有關。 2.survivin與脈絡膜黑色素瘤的細胞類型及腫瘤浸潤程度有明確的相關性，在一定程度上可以反映其惡性程度和作為預后的指標。 3.TUNEL法測得的細胞凋亡指數(shù)是反映腫瘤細胞的惡性程度，評價其生物學行為的參數(shù)，脈絡膜黑色素瘤中survivin表達與凋亡指數(shù)呈負相關。