室間隔缺損血清標志蛋白質的篩查和鑒定研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:篩查出室間隔缺損(ventricular septal defect,VSD)患者的血清標志蛋白質,并對其進行分離、純化和鑒定,明確其身份,探討其生理功能與心臟發(fā)育的關系。
　　方法:(1)室間隔缺損血清標志蛋白質的篩查:采集30例VSD患者和30例健康對照者的血清,應用表面增強激光解析及電離飛行時間質譜(SELDI-TOF-MS)檢測兩組人群的血清蛋白質表達譜并分析差異蛋白質。數據分析分別由Biomarker Wizard

2、和Biomarker Parrern兩個軟件完成。(2)室間隔缺損血清標志蛋白質的分離和鑒定:應用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離差異蛋白質,液相色譜串聯質譜(LC-MS)進一步分離并鑒定差異蛋白質,對目的蛋白質進行生物信息學分析,闡述其結構和功能。
　　結果:室間隔缺損血清標志蛋白質的篩查結果:(1)在分子量2000-20000Da范圍,VSD組與對照組表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)的蛋白質有15個,其中6個蛋白質表達上

3、調,9個蛋白質表達下調。(2)分子量為5419Da、5640Da、7779Da、15141 Da和15884Da的蛋白質在VSD組與對照組的相對表達比值大于2,其中分子量為15141Da和15884Da的蛋白質相對表達比值大于5。室間隔缺損血清標志蛋白質的分離和鑒定結果:(1)聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離出VSD組在15KDa左右與對照組存在明顯差異蛋白質條帶。(2)電場軌道阱回旋共振組合質譜(LTQOrbitrap)鑒定出前纖維

4、蛋白-1(Profilin-1)的唯一片段4個,覆蓋率93％,可信度為100%;半胱氨酸蛋白酶抑制劑 C(Cystatin C)的唯一性片段6個,覆蓋率90%,可信度為100%。(3)生物信息學分析發(fā)現,Profilin-1含140個氨基酸,分子量為15054Da,與SELDI檢測到的目標蛋白質分子量一致,質譜鑒定到的4個唯一性片段與人Profilin-1完全匹配;Cystatin C含146個氨基酸,分子量為15779Da,與SELD

5、I檢測到的目標蛋白分子量一致,質譜鑒定到的6個唯一性片段與人Cystatin C完全匹配。
　　結論:(1)VSD患者與健康對照者外周血血清蛋白質圖譜存在差異。(2)分子量為5419Da、5640Da、7779Da、15141 Da和15884Da的差異蛋白質可能是與 VSD相關的特異性蛋白質。(3)進一步分離鑒定發(fā)現, Profilin-1和 Cystatin C可能是室間隔缺損的血清標志蛋白質之一。(4) SELDI-TOF-

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