相思樹離體培養(yǎng)與人工種子制作.pdf

1、本研究以厚莢相思(Acaciacrassicarpa)、黑木相思(A.melanoxvlon)、灰木相思(A.implexa)、莢竹桃相思(A.nerifolia)、薄莢相思(A.lcptocarpa)、卷莢相思(A.cincinnata)、紋英相思(A.aulacocarpa)和臺灣相思(A.confusa)等相思樹的種子、幼胚、莖段為外植體，進行相思樹的離體培養(yǎng)與人工種子制作研究。試驗以厚英相思、臺灣相思為主要研究對象，進行如下研究

2、：①厚莢相思高效離體再生體系的建立；②臺灣相思等樹種的愈傷組織誘導、懸浮細胞系的建立及其原生質體的分離；③黑木相思、灰木相思、薄莢相思、卷莢相思、紋莢相思的離體繁殖；④厚莢相思人工種子制作及其RAPD分析等。主要研究結果如下： 1.相思樹種子預處理方式對種子離體萌發(fā)的影響。采用濃硫酸結合沸水浸泡預處理方式(濃硫酸25min+沸水浸泡20min)處理厚莢相思種子，種子離體萌發(fā)率可達95.0％。采用該方法處理多種進口相思原種，在離體

3、條件下都可達80.0％-90.0％的萌發(fā)率。 2.厚莢相思高效離體再生體系的建立。試驗結果表明：天然添加物對增殖率的影響效果是香蕉勻漿物＞番茄勻漿物＞相思樹葉片；用1/2MS+0.1％AC培養(yǎng)基在短期內可達到快速增殖、壯苗、生根的同步效果；以沙子：相思樹林地上表土(3∶1)作為移栽基質，移栽成活率可達87.5％。 3.應用石蠟切片技術進行厚莢相思綠色瘤狀物(GTT)的組織細胞學觀察。觀察表明：綠色瘤狀物同時具有不定芽發(fā)生

4、和體細胞胚胎發(fā)生2種途徑；不定芽原基與體細胞胚起源于莖段基部所形成的愈傷組織表層細胞，屬于外起源；體細胞胚經歷了原胚、球形胚、心形胚、子葉胚階段。 4.相思樹愈傷組織系的建立與長期繼代保持。試驗以相思樹種子離體萌發(fā)的下胚軸、幼胚為外植體誘導愈傷組織。研究結果表明：采用0.5mg.L-12,4-D和2.0mg.L-1BA的激素組合有利于愈傷組織的誘導；誘導出的淡黃、松散的愈傷組織可在附加0.5mg.L-12,4-D、2.0mg.L

5、-1BA和300mg.L-1LH的培養(yǎng)基中長期繼代。 5.臺灣相思懸浮培養(yǎng)細胞系的建立與長期保持。研究表明：選用淡黃、松散、增殖旺盛的愈傷在2wk內可快速建立懸浮細胞系；蔗糖是懸浮細胞系保持的理想碳源；采用固—液輪回培養(yǎng)法可對懸浮細胞系進行長期保持。 6.臺灣相思懸浮細胞系原生質體的分離純化。以生長旺盛、松散的懸浮細胞為材料，在含1％纖維素酶和2％果膠酶的CPW-13M酶解液中，在黑暗靜置條件下酶解16h，可獲得產量和存

6、活率都較高的原生質體。 7.厚莢相思人工種子制作技術體系的建立。研究表明：以厚莢相思2-3mm的微芽為包埋材料，在海藻酸鈣包埋系統(tǒng)中2％海藻酸鈉為最佳的包埋濃度，20min為最佳的包埋時間；中空海藻酸鈣包埋法優(yōu)于海藻酸鈣包埋法，用該法制成的人工種子無菌萌芽率高達100％，轉株率達83.5％；營養(yǎng)物質和激素的使用有利于人工種子萌芽率的提高；人工種子較適的貯藏溫度為15℃。 8.厚莢相思人工種子再生植株的RAPD檢測。對相同