運用數(shù)字圖像技術測定新生大鼠肺形態(tài)發(fā)育的動態(tài)改變.pdf

1、目的：1.運用數(shù)字圖像分析技術測定新生大鼠肺形態(tài)發(fā)育的動態(tài)改變，探求可靠實用的肺形態(tài)測量方法。
　　2.應用數(shù)字圖像分析技術測定不同劑量鄰苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)暴露后的第14天和第21天新生鼠肺發(fā)育形態(tài)學改變，探討DEHP對新生鼠肺發(fā)育的影響。
　　方法：1.實驗動物和分組①:Sprague-Dawley新生鼠75只，出生后第1天開始每天給新生鼠腹腔注射玉米油(0.2ml)。按時間點分5組，每組選取6只，分別在第1

2、天，第4天，第7天，第14天，第21天處死子鼠，獲取肺組織標本，并進行檢測。②:Sprague-Dawley新生鼠90只，出生后第1天開始每天給新生鼠腹腔注射玉米油+DEHP(0.2ml)，實驗組分為低劑量組(DEHP10mg/kg/d)、中劑量組(DEHP100mg/kg/d)和高劑量組(DEHP750mg/kg/d)。每組選取6只，在第14天和第21天處死子鼠，獲取肺組織標本，分別進行檢測。
　　2.檢測指標:分別在生后第1天

3、，第4天，第7天，第14天和第21天給新生大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(35mg/kg)，麻醉后處死大鼠，取右肺近胸膜處肺組織，常規(guī)蘇木素伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察肺組織形態(tài)學上的動態(tài)改變，拍攝相同放大倍數(shù)下的肺組織切片的圖像，利用計算機圖像處理累計其像素點，測定肺間質比例;利用圖像分析軟件進行圖像過濾，轉化為二位圖像，最后形成骨架化肺圖，測量單位面積內的肺骨架長度比值。
　　結果：1.光鏡下肺形態(tài)學分析第1天可見肺囊泡樣結構，腔小

4、、壁厚，肺間隔較厚。第4天肺泡腔內開始出現(xiàn)次級隔，肺泡腔結構不規(guī)則。第7天至第21天時肺泡結構逐漸規(guī)整，大小較均勻，肺泡數(shù)目增多，肺泡間隔變薄。DEHP暴露組第14天:低劑量組與對照組在肺形態(tài)學方面比較無顯著性差異，中、高劑量組可見肺間質增厚、間質細胞增多，肺泡數(shù)目減少。第21天各劑量組之間光鏡下未見明顯形態(tài)學改變。
　　2.肺間質比肺組織內的間質比例從第1天開始至第21天呈逐漸下降趨勢。第1天與第4天比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.0

5、5);第4天與第7天比較有顯著性差異(P＜0.05)，與第14天、第21天比較差異更顯著（P＜0.01）;第7天與第14天、第21天比較有顯著性差異(P＜0.01);第14天與第21天比較無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。DEHP暴露組第14天:低劑量組與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）;與中、高劑量組比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示中、高劑量DEHP作用下肺間質發(fā)育受到抑制。第21天實驗組和對照組肺間質比例比較均沒有統(tǒng)計學

6、差異(P＞0.05)，但第14天與第21天中、高劑量組之間比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　3.肺骨架長度比值肺骨架長度比值從第1天開始至第21天逐漸增大，第1天與第4天比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;第4天與第7天、第14天、第21天比較均有非常顯著性差異（P＜0.01）;第7天與第14天、第21天比較有顯著性差異(P＜0.01);第14天與第21天比較無明顯統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。DEHP暴露組第14天:低劑量組與

7、對照組比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;與中、高劑量組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，提示中、高劑量DEHP作用下肺泡發(fā)育受到影響。第21天實驗組和對照組肺骨架長度比值比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但第14天與第21天中、高劑量組之間比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。
　　結論：1.運用數(shù)字圖像技術測定新生鼠肺發(fā)育的形態(tài)學改變，量化肺發(fā)育的指標，科學、客觀的反應肺發(fā)育過程中肺間質和肺泡的形態(tài)學改變，方法可靠、實用，值得推廣。